[发明专利]制备生长激素释放抑制素的方法

权利要求书

1.一种制备生长激素释放抑制素的方法，所述生长激素释放抑制素具有下式所示结构：

其特征在于，所述方法包括：

步骤1：将Fmoc-Phe-OH通过氨基酸缩合反应连接到树脂上，脱除Fmoc保护基；

步骤2：依次将保护氨基酸与所述树脂上的氨基酸进行缩合反应和脱除Fmoc保护基，所述保护氨基酸为Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Boc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-D-Dab(Alloc)-OH、Boc-Tyr(tBu)-OH；

步骤3：脱除步骤3所得树脂上氨基酸的Alloc保护基，并将所得多肽从树脂上切割下来；

步骤4：将所述多肽进行环化处理，得到环化多肽；

步骤5：切除所述环化多肽上的保护基，得到所述生长激素释放抑制素；

所述Alloc保护基是通过下列方式脱除的：

将四三苯基磷钯、苯硅烷和步骤3所得树脂于有机溶剂中反应1～3小时；

清洗树脂，重复上步操作至少一次；基于1g所述树脂，四三苯基磷钯的添加量为0.1～0.5g，苯硅烷的添加量为350～400mL，所述有机溶剂选自二氯甲烷；

所述环化处理包括：

将缩合剂和N-甲基吗啡啉于第一有机溶剂中，得到第一混合液；

将所述多肽溶于第二有机溶剂中，得到第二混合液；

将所述第一混合液滴加至所述第二混合液中，室温反应20～28小时，得到含有环化多肽的反应液；

所述缩合剂选自PyAOP和HOAt，质量比为1：(0.5～1.5)，

所述第一有机溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺，所述第二有机溶剂选自二氯甲烷。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缩合剂的添加量为所述多肽添加量的4～6倍，N-甲基吗啡啉的添加量为所述多肽添加量的8～12倍。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：

将所述反应液进行浓缩，并将所得浓缩液与冰乙醚混合，收集沉淀，干燥。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，切除所述环化多肽上的保护基是通过下列方式进行的：

提供切割液，所述切割液含有三氯乙酸、水、苯酚和三异丙基氯甲硅烷；

将所述环化多肽和切割液反应1～5小时，去除三氯乙酸，用冰乙醚与剩余溶液混合，收集沉淀，干燥。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，基于1mL水，所述三氯乙酸、苯酚和三异丙基氯甲硅烷的用量分别为15～20mL、0.5～1.5g和0.5～1.5mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：利用液相色谱将所述切除环化多肽上的保护基所得产物进行纯化，得到所述生长激素释放抑制素；

其中，所述液相色谱采用的流动相为含有0.05～0.2体积％三氟乙酸的水和含有0.05～0.2体积％三氟乙酸的乙腈。