[发明专利]一种高免疫活性酵母细胞壁多糖的提取方法

说明书

本发明涉及天然产物有效成分的提取领域，提出了一种高免疫活性酵母细胞壁多糖的提取方法，包括以下步骤：S1、啤酒酵母预处理S2、冻融法破壁：将预处理的啤酒酵母泥置于‑20℃下冷冻1～2h，再置于80℃水中骤然升温使其融化，后4000r/min离心5～10min，如此反复3次，得沉淀物；S3、酶解：将S2所得的沉淀物与蒸馏水按1:(10～15)的体积混合，用盐酸调pH值为6～8，加入蛋白酶、多糖酶、复配促进剂，进行超声波处理，将混合物5000r/min离心5～10min，收集上清液；S4、洗涤干燥：上清液用1～2倍体积的质量浓度为60％～85％乙醇沉淀，沉淀物丙酮洗涤两次，真空干燥至恒重即得酵母细胞壁多糖干品。通过上述技术方案，解决了现有技术中的纯度、提取率低，免疫活性不佳的问题。

技术领域

本发明涉及天然产物有效成分的提取领域，具体的，涉及一种高免疫活性酵母细胞壁多糖的提取方法。

背景技术

酵母细胞壁主要由碳水化合物及蛋白质组成，碳水化合物主要为葡聚糖和甘露聚糖。酵母细胞壁多糖能被动物体内有益菌利用的功能性寡糖，作为一种绿色非营养调控物质，影响糖代谢，促进肠道功能，人体消化道中稳定性好，活性高，具有一定的免疫调节功能，如对沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肉毒梭状芽孢杆菌和肉毒梭状芽孢杆菌等有很好的抑制作用。此外，酵母细胞壁多糖对沙门氏肠炎杆菌、摩氏变形菌、柠檬酸杆菌具有100％的截取作用；其通过物理吸附或直接结合霉菌毒素而不影响其他成分。

由于酵母细胞中的蛋白质和脂类等物质与细胞壁多糖以大分子糖类聚合物的形式存在，因此需要对细胞壁多糖进行分离、提取后再利用。目前，酵母多糖有效成分提取的方法较多，如研磨法、冻融法、高压均质法、超声波法、碱溶法、常规水提法、索氏提取法等，这些传统方法存在着提取率低、纯度不高等不足。

发明内容

本发明提出一种高免疫活性酵母细胞壁多糖的提取方法，解决了现有技术中的纯度、提取率低，免疫活性不佳的问题。

本发明的技术方案如下：

一种高免疫活性酵母细胞壁多糖的提取方法，包括以下步骤：

S1、啤酒酵母预处理：将啤酒酵母与水按照质量体积比为1:(10～20)的比例混合，充分搅拌均匀，4000r/min离心5～10min，反复洗涤，经100目筛过滤，去除可见杂质，后加入与水等体积的5％酒石酸溶液，搅拌静置除味，4000r/min离心5～10min，得到啤酒酵母预处理物；

S2、冻融法破壁：将预处理的啤酒酵母泥置于-20℃下冷冻1～2h，再置于80℃水中骤然升温使其融化，后4000r/min离心5～10min，如此反复3次，得沉淀物；

S3、酶解：将S2所得的沉淀物与蒸馏水按1:(10～15)的体积混合，用盐酸调pH值为6～8，加入蛋白酶、多糖酶、复配促进剂，进行超声波处理，将混合物5000r/min离心5～10min，收集上清液；

S4、洗涤干燥：上清液用1～2倍体积的质量浓度为60％～85％乙醇沉淀，沉淀物丙酮洗涤两次，真空干燥至恒重即得酵母细胞壁多糖干品。

作为进一步的技术方案，所述步骤S3中超声波处理的条件为温度45℃，超声波功率50W，时间4S，间歇5S，超声时间30min。

作为进一步的技术方案，所述步骤S3多糖酶包括2.5～5‰甘露聚糖酶、0.2～1‰葡聚糖酶、0.2～1‰纤维素酶，所占比例按照啤酒酵母干料质量比计算。

作为进一步的技术方案，所述蛋白酶包括无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或多种。

作为进一步的技术方案，所述蛋白酶加入量为啤酒酵母干料的0.1～0.5％。

作为进一步的技术方案，所述复配促进剂为葡萄糖酸锰和葡萄糖酸钴，其质量比为(4～5):1。