[发明专利]一种CRISPR SpCas9(K510A)突变体及其应用

权利要求书

1.一种SpCas9突变体或其活性片段，其特征在于，所述SpCas9突变体或其活性片段包括：与SEQ ID NO.1所示的野生型SpCas9多肽具有至少90％的氨基酸同一性，且所述野生型SpCas9多肽的REC3结构域的第510位氨基酸残基突变为丙氨酸残基，其中，所述SpCas9突变体具有内切核酸酶活性。

2.根据权利要求1所述的SpCas9突变体或其活性片段，其特征在于，所述SpCas9突变体或其活性片段的氨基酸序列包括：

(1)SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；或

(2)SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰后且具内切核酸酶活性的序列。

3.编码权利要求1或2所述SpCas9突变体或其活性片段的基因。

4.一种组合物，其特征在于，所述组合物含有权利要求1或2所述的SpCas9突变体或其活性片段。

5.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸含有权利要求3所述的基因。

6.一种向导多核苷酸/Cas复合物，其特征在于，所述向导多核苷酸/Cas复合物包含至少一种向导多核苷酸和至少一种权利要求1或2所述的SpCas9突变体或其活性片段；

其中，所述向导多核苷酸是嵌合的非天然存在的向导多核苷酸；

所述向导多核苷酸/Cas复合物能完全或部分识别、结合靶序列并使靶序列产生切口或解旋、切割靶序列。

7.根据权利要求6所述的向导多核苷酸/Cas复合物，其特征在于，所述向导多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

8.含有权利要求3所述基因的重组载体、重组菌或细胞。

9.一种修饰细胞基因组中的靶位点的方法，包括：将权利要求6或7所述的向导多核苷酸/Cas复合物导入细胞中，使所述细胞中的靶位点具有如下修饰：

至少一个核苷酸的替代；和/或

至少一个核苷酸的缺失；和/或

至少一个核苷酸的插入。

10.权利要求1或2所述SpCas9突变体或其活性片段或权利要求3所述基因在基因编辑中的应用。