[发明专利]DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法

说明书

本发明属于细胞诱导培养方法技术领域，尤其为DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法，其方法包括：（1）通过慢病毒载体将GPC3‑ODC422‑461基因序列转入iPS，（2）慢病毒生产通过转染293T‑17细胞产生慢病毒颗粒。转染后36和60小时收获病毒。该DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法，GPC3‑ODC422‑461融合蛋白可以用于在DC细胞内部诱导表达，有助于DC细胞呈递肿瘤抗原，并提高体内T细胞的抗原呈递效率，激活T细胞杀伤肿瘤细胞，此外该融合蛋白可用于细胞治疗，因为该融合蛋白的半衰期很短，作为药物其毒性与副作用较小，并能够与免疫细胞产生协同效应，使得化学原料的浪费程度得以降低，实验数据得以正常发挥，提升实验的精度，为人们探索生物学革命作出了较好的进步意义。

技术领域

本发明涉及细胞诱导培养方法技术领域，具体为DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法。

背景技术

随着经济社会的发展、人们健康意识的提升以及生物学科技革命的推动，生物学革命的出现对于人们健康的意义有着重要的促进作用，对于关注健康的人们来说是个福音，DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法对于人们应用最新的生物学科技有着重要的作用。

以往的DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法，有着较大的成本，对于实验室的要求有着苛刻的条件，而且由于以往科学家与科技工作人员的实验是非信息化的处理，因而造成了不必要的人工负担，造成了大量的人力物力的消耗，不仅浪费资源，而且浪费时间，作业效率低下，实验的精度也非常欠缺，最终的实验结果数据也较难以令人信服，整个实验的数据无法形成规律性的模型，对于后期的应用科技来说意义降低了不少。

综上所述，现有的DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法，无法对浪费资源，作业效率低，实验精度也不高，信息化数字化程度低下等缺点。针对上述问题，急需在原有DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法基础上进行创新设计。

发明内容

本发明的目的在于提供DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法，以解决上述背景技术中提出浪费资源，作业效率低，实验精度也不高，信息化数字化程度低下等缺点的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：DC细胞诱导试剂盒及DC细胞诱导培养方法，包括以下步骤：

包括以下步骤：

（1）通过慢病毒载体将GPC3-ODC422-461基因序列转入iPS。

（2）慢病毒生产通过转染293T-17细胞产生慢病毒颗粒。转染后36和60小时收获病毒，并在23,000r.p.m通过超速离心浓缩。在4°C下放置2h15min。

（3）感染培养基为补充有Polybrene的EHT培养基（8微克ml-1，Sigma）。慢病毒感染总量为250μl（24孔板）。iPS在旋转接种过程中很容易受到损害，因此感染是静置12h，然后向其中添加250μl新鲜EHT培养基稀聚乙烯。

（4）将平行孔再培养3天以进行测量细胞百分比的感染效率，实现感染效率的30–70％。

优选的，所述转移至细胞培养瓶中,置于37℃、5%CO2孵箱中孵育2小时。弃去上层未贴壁的淋巴细胞,用预温至37℃的PBS将残余液体洗去,在培养瓶中加入含有IL-4(1000U/ml)、GM-CSF(1000U/ml)和10%小牛血清的RPMI1640培养液,每3天半量换液。

优选的，所述培养24及48小时后收获未转染细胞及转染pIRES-EGFP的细胞,预冷的PBS洗细胞一次,分别加入检测抗体后冰上孵育30分钟,PBS洗去未结合抗体后重悬细胞,通过流式细胞术分析细胞CD11c、CD80、CD83、CD86及HLA-DR的表达水平。

优选的，所述通过流氏细胞术分析细胞CD69的表达水平，利用qPCR测定IFN-γ分泌表达情况测定T细胞激活。