[发明专利]一种负载外泌体的口服结肠靶向给药的聚合物的制备方法

权利要求书

1.一种负载外泌体的口服结肠靶向给药的聚合物的制备方法，其特征在于，所述方法步骤包括：

（1）收集间充质干细胞培养上清液，通过差速离心法提取外泌体；

（2）在魔芋葡甘聚糖水溶液中加入氧化剂高碘酸盐后搅拌反应，之后加入乙二醇、透析，固液分离取上清液，冷冻干燥制备得到氧化魔芋葡甘聚糖；

（3）将步骤（2）制备得到的氧化魔芋葡甘聚糖和壳聚糖季铵盐分别溶解于PBS缓冲液中得到氧化魔芋葡甘聚糖溶液和壳聚糖季铵盐溶液，所述壳聚糖季铵盐在PBS中溶解的终浓度为0.01-1.0 mg/mL；

（4）将壳聚糖季铵盐溶液与外泌体恒定旋转20-30分钟，用PBS洗涤，离心，收集沉淀，得到(MSCs-EXO)-HTCC聚合物；

（5）将步骤（4）得到的(MSCs-EXO)-HTCC聚合物与氧化魔芋葡甘聚糖溶液恒定旋转20-30分钟，用PBS洗涤，离心，得到(MSCs-EXO)-(HTCC/OKGM)聚合物；

重复步骤（4）和（5）2~3次，即可制备得到负载干细胞用于口服结肠靶向给药的层层自组装聚合物，(MSCs-EXO)-(HTCC/OKGM) _n聚合物，n为包裹层数。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖的制备具体包括：在500mL去离子水中加入5gKGM粉末，搅拌溶解，滴加10mL0.5mol/L高碘酸钠水溶液，40℃避光搅拌4h；之后向反应混合物中加入10mL乙二醇搅拌2h，以中和未反应的高碘酸盐；将溶液用透析膜透析3天，直到渗析液中不含碘酸盐；将反应产物以2500r/min离心20min，取上清液，真空冷冻干燥获得OKGM，将干燥的样品储存在干燥器中以供下一步使用。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中氧化魔芋葡甘聚糖在PBS中溶解的终浓度为0.01-1.0mg/mL。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）和（5）中，PBS为磷酸缓冲盐溶液，pH为7.2-7.4，洗涤2~3次。

5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述外泌体与壳聚糖季铵盐溶液的质量体积比为200-500μg：1-3mL。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述外泌体与壳聚糖季铵盐溶液的质量体积比为200-500μg：1-3mL。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述外泌体与壳聚糖季铵盐溶液的质量体积比为200-500μg：1-3mL。

8.根据权利要求1、2或6~7任一项所述的制备方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖溶液与壳聚糖季铵盐溶液的体积比为l-3：1-3。

9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖溶液与壳聚糖季铵盐溶液的体积比为l-3：1-3。

10.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖溶液与壳聚糖季铵盐溶液的体积比为l-3：1-3。

11.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖溶液与壳聚糖季铵盐溶液的体积比为l-3：1-3。

12.权利要求1~11任一项所述的制备方法制备得到的负载外泌体的口服结肠靶向给药的聚合物。

13.包含权利要求12所述的负载外泌体的口服结肠靶向给药的聚合物的药物。

14.权利要求12所述的负载外泌体的口服结肠靶向给药的聚合物在制备用于治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。