[发明专利]寨卡病毒丝氨酸蛋白酶在去除重组蛋白亲合标签中的应用在审
| 申请号： | 202011593865.5 | 申请日： | 2020-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN112522242A | 公开（公告）日： | 2021-03-19 |
| 发明（设计）人： | 李清心;吴金川;陈骏佳;蚁细苗;班雯婷;康佩姿 | 申请（专利权）人： | 广东省科学院生物工程研究所 |
| 主分类号： | C12N9/50 | 分类号： | C12N9/50;C12P21/06 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 朱双;刘明星 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒 丝氨酸 蛋白酶 去除 重组 蛋白 标签 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.寨卡病毒丝氨酸蛋白酶在去除重组蛋白亲合标签中的应用，其特征在于，所述的寨卡病毒丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的重组蛋白的目标蛋白中不含有氨基酸序列NKRRGS。
2.一种亲合标签的去除方法，其特征在于，包括以下步骤：
在重组蛋白表达载体的构建过程中，将表达天冬酰胺-赖氨酸-精氨酸-精氨酸-甘氨酸-丝氨酸的基因序列插入到表达亲合标签的基因序列和表达目标蛋白的基因序列之间，构建得到重组蛋白表达载体；然后将表达载体转入到宿主细胞中进行重组蛋白表达，纯化重组蛋白，然后加入寨卡病毒丝氨酸蛋白酶并混合，进行酶切反应，纯化后得到去除了亲和标签的目标蛋白；
所述的寨卡病毒丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的目标蛋白中不含有氨基酸序列NKRRGS。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的表达载体为pET29b载体、pET载体或pGEX载体。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的亲合标签为谷胱甘肽-S-转移酶标签或多聚组氨酸标签。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的纯化重组蛋白利用亲合层析法进行，所述的酶切反应后的纯化是经分子筛层析柱纯化得到目标蛋白。
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