[发明专利]一种粉葛愈伤组织的诱导方法

权利要求书

1.一种粉葛愈伤组织的诱导方法，包括外植体的取材与筛选，外植体的消毒灭菌，确定愈伤诱导培养条件和愈伤增殖条件，其特征在于：包括以下步骤：

（1）外植体的获取与筛选：选取长势较好的粉葛植株，取粉葛幼嫩健壮的茎段，剪下作为外植体，经消毒灭菌后接种于诱导培养基上；

（2）外植体的消毒灭菌：将幼嫩健壮的茎段放在自来水下流水冲洗半小时，然后放进有洗洁精的水里用毛刷轻轻刷洗，用自来水清洗3-5次，再用纯水清洗1-2次，将其装进灭好菌的组培瓶里，然后放进超净工作台，用浓度为75%的酒精消毒灭菌30s，然后用无菌水清洗2-3次，再用0.1%的氯化汞溶液加2滴吐温80消毒灭菌8-10min，最后用无菌水冲洗5-7次；

（3）愈伤诱导条件的探索：将灭菌后的粉葛材料茎切成1.5cm的茎段，多余部分去除，将切好的茎放到诱导培养基中，所述的诱导培养基包括MS培养基，浓度为0.5-0.9mg/L的6-BA，浓度为0.1-0.2mg/L的IBA，以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，放在黑暗、遮光、光照的条件下培养7-20天，获得少量愈伤组织；

（4）愈伤增殖条件探索：将诱导得到的愈伤组织转接到愈伤增殖培养基中，所述的愈伤增殖培养基包括1/2MS培养基，浓度为0.1-0.9mg/L的6-BA，浓度为0-1mg/L的2,4-D以及浓度为0.2-0.8mg/L的IBA ，200mg/L的酸水解酪蛋白，15g/L的蔗糖以及7g/L的琼脂，继代周期为7天，继代次数为4次，经过28天的增殖培养获得大量的愈伤组织。

2.根据权利要求1所述的一种粉葛愈伤组织的诱导方法，其特征在于：所述步骤（1）中，粉葛为1-2年生来源于广西藤县的葛藤。

3.根据权利要求1所述的一种粉葛愈伤组织的诱导方法，其特征在于：所述步骤（2）中，消毒灭菌条件为：用浓度为75%的酒精消毒灭菌30s，无菌水冲洗2次后，再用浓度为0.1%的氯化汞溶液加2滴吐温80消毒灭菌8分钟，无菌水清洗5次。

4.根据权利要求1所述的一种粉葛愈伤组织的诱导方法，其特征在于：所述步骤（3）中，培养基组成是MS+0.7mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g糖+7g琼脂，PH值为5.8，培养条件为温度25℃及遮光。

5.根据权利要求1所述的一种粉葛愈伤组织的诱导方法，其特征在于：所述步骤（4）中，培养基组成是1/2MS+0.5mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA+200mg/L酸水解酪蛋白+15g糖+7g琼脂，PH值为5.8。