[发明专利]快速检测大肠杆菌试验方法

说明书

本发明公开了快速检测大肠杆菌试验方法，所述方法如下，步骤一：在无菌条件下，将样本用生理盐水溶解，并将其溶解后的样品溶液通过生理盐水进行反复冲洗，步骤二：将通过生理盐水溶解并清洗后的样本放入到高速分散机中进行分散，步骤三：离心后的样本再用过滤膜进行多膜离心过滤，过滤后得滤液，将滤液分装至若干组无菌试管中，并在其无菌试管内加入蒸馏水进行稀释处理；本发明通过设计的酸碱调节制剂分别为1mol/L的NaOH和1mol/L的HCl，对样本溶液实现酸性调节，使样本中的菌株生存条件更加适宜，增加本发明菌株的培养可靠性，避免菌株发生失活而影响实验结果。

技术领域

本发明属于中成药制备技术领域，具体涉及快速检测大肠杆菌试验方法。

背景技术

大肠杆菌和大肠菌群都是存在于温血动物肠道和粪便的细菌，是条件性致病菌，主要造成水体污染，也可能引起食物中毒的发生，并且由于大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道病原菌相近，它的出现也可能预示着某些肠道病原菌的存在，因此该细菌是国际上公认的卫生监测指示菌，在对中成药进行制备中，所采用污染水源进行制备，极易造成中成药污染而失去药性和发生药性变异，影响后期服用安全性。

现有的对大肠杆菌试验方法采用培养观察和染色试验方法对大肠杆菌进行试验检测，在染色中将其样本在乳糖发酵管中培养，观察菌落，若乳糖发酵管中产气，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，即为大肠杆菌阳性一般采用无菌操作，在此试验方法过程中需要对样本经过相应的处理后，做一定的倍比稀释，然后在一定条件下培养，最后在电镜、显微镜下观察，根据菌落的颜色、形态等生化指标进行分辨，并计算平板的菌落数，该种试验方法在对样本进行培养过程中，只是将其样本置于无菌条件下，通过稀释和培养基进行培养，使其产生处一定数量的菌落进行观察，由于没有通过氢氧化钠和氯化氢对样板进行酸碱调节，导致其样本的酸碱性不能稳定处于样品匀液的pH值在一定范围，影响其试验精准性的问题，为此我们提出快速检测大肠杆菌试验方法。

发明内容

本发明的目的在于提供快速检测大肠杆菌试验方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：快速检测大肠杆菌试验方法，所述方法如下：

步骤一：在无菌条件下，将样本用生理盐水溶解，并将其溶解后的样品溶液通过生理盐水进行反复冲洗；

步骤二：将通过生理盐水溶解并清洗后的样本放入到高速分散机中进行分散；

步骤三：离心后的样本再用过滤膜进行多膜离心过滤，过滤后得滤液，将滤液分装至若干组无菌试管中，并在其无菌试管内加入蒸馏水进行稀释处理；

步骤四：在无菌条件下对稀释样本液进行PH值测定，得到稀释样本液的PH值，根据其PH值的数值进行酸碱调节处理；

步骤五：在无菌条件下，从通过酸碱调节处理后若干组装有稀释样本液的无菌试管内分别相应取出3份1mL的稀释液，将其取出的稀释样本液分别移至培养基上培养；

步骤六：观察所述步骤五中培养基有无气体产生，若无气体产生，则为大肠杆菌阴性，若有气体产生，则将培养基上的菌落进行革兰氏染色，同时接种在乳糖发酵管中培养，观察菌落，若乳糖发酵管中产气，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，即为大肠杆菌阳性。

优选的，所述步骤二中高速分散机的转速为9000r/min，离心40S。

优选的，所述步骤四中在无菌条件下的稀释样本液PH值正常值为6.5至7.5之间，所述酸碱调节制剂分别为1mol/L的NaOH和1mol/L的HCl。

优选的，所述在无菌条件下的稀释样本液PH值正常值为6.5至7.5之间时，无需进行酸碱调节；其测定的PH值低于6.5时，通过所述的酸碱调节制剂中的1mol/L的HCl进行酸性调节；其测定的PH值高于7.5时，通过所述的酸碱调节制剂中的1mol/L的NaOH进行碱性调节，对其强酸环境进行中和处理。