[发明专利]一种血液中类固醇激素的纯化富集及其检测方法

说明书

本发明涉及一种血中类固醇激素的纯化富集及其检测方法，属于医学检验分析技术领域。含类固醇激素的样本采用以硅胶为基质的低密度三点键合C18填料制备，通过优化制备过程中溶剂用量及淋洗液配比等参数，实现对样品中类固醇激素的纯化富集。制备后的类固醇激素样品通过一定条件的液相色谱‑串联质谱法进行分析，实现一次性同时检测多种类固醇激素。该方法具有稳定性好、灵敏度高、回收率高、操作简便可控、可实现自动化操作等特点。

技术领域

本发明属于医学检验分析技术领域，涉及一种血液中类固醇激素的纯化富集及其检测方法。

技术背景

类固醇激素是一类四环脂肪烃化合物，具有环戊烷多氢菲母核，均由胆固醇衍生而来，通过内分泌系统调节生物体内代谢过程。孕激素是所有其他类固醇激素的前体物质。皮质激素主要由肾上腺产生，主要与葡萄糖和矿物质的代谢有关。性激素分为雄性激素和雌性激素两类，两者之间可以互相转化，在不同性别的动物体内存在着一种平衡。男性体内以雄激素为主，女性体内以雌激素为主。当机体内激素水平出现异常波动时会引起重大疾病，如先天性肾上腺皮质增生症、肾上腺皮质功能减退症(Addison病)、雄激素增多症、库欣综合征、多囊卵巢综合征、先天性代谢缺陷和畸形、以及其他代谢紊乱症。准确评估机体内激素水平在临床上具有重要意义。

目前主要采用免疫法对类固醇激素进行测定，存在特异性差的缺点，抗体的交叉反应常导致结果的不准确性，并且无法在一次检测中获得多种类固醇激素的结果。随着近年来高效液相-串联质谱法在类固醇激素检测中的逐步应用，其高精密度和准确性越来越受到行业的认可。但是类固醇激素检测仍然存在一些问题，如激素在人体内含量往往较低，在检测灵敏度上的问题；内源性物质对激素检测的干扰问题；基质效应产生的结果变异性；生物样本的前处理技术稳定性等问题。基于此，迫切需要开发一种有效的用于检测类固醇激素的纯化富集材料及其检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测血中类固醇激素的纯化富集及其检测方法。

在一个具体实施方案中，本发明提供一种血液样品中类固醇激素的检测方法，所述方法包括：

(1)用固相萃取柱富集纯化血清样品中的一种或多种类固醇激素类成分；

(2)任选地，用衍生化试剂使所述富集纯化的类固醇激素类成分衍生化；

(3)用液相色谱-串联质谱检测所述衍生化的和/或未衍生化的一种或多种类固醇激素类成分。

在一个实施例中，所述固相萃取柱采用以硅胶为基质的键合填料，所述填料为键合密度为1.6-2.2μmol/m²，含碳量在10％-12％的低密度三点键合C18填料。

进一步地，所述填料的硅胶颗粒度为10μm-100μm，孔径为比表面积100m²/g-600m²/g。

进一步地，所述固相萃取材料的结构式如下所示：

进一步地，所述固相萃取柱为30-100mg/1ml或100-500mg/5ml规格的固相萃取柱。

在一些实施方案中，所述类固醇激素选自雌激素、孕激素、雄激素或皮质激素的一种或多种。

进一步地，所述雌激素选自雌酮、雌二醇、雌三醇的一种或多种；所述孕激素选自孕酮、17-羟孕酮、孕烯醇酮、17-羟孕烯醇酮的一种或多种；所述雄激素选自睾酮、雄烯二酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮、脱氢表雄酮硫酸酯的一种或几种；所述皮质激素选自皮质醇、皮质酮、可的松、11-脱氧皮质酮、11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇的一种或多种。