[发明专利]一种生物冷冻保护剂及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202011595945.4 | 申请日： | 2020-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN112661825A | 公开（公告）日： | 2021-04-16 |
| 发明（设计）人： | 潘峰;刘迪 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 |
| 主分类号： | C07K14/46 | 分类号： | C07K14/46;C12N15/12;C12N15/70;A01N1/02 |
| 代理公司： | 武汉楚天专利事务所 42113 | 代理人： | 雷速 |
| 地址： | 430022 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生物 冷冻 保护 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如序列表中序列3所示。
2.权利要求1所述重组蛋白的编码基因。
3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于：其核苷酸序列如序列表中序列4所示。
4.一种表达权利要求1所述蛋白的重组质粒，其特征在于：包括权利要求2或3所述的编码基因。
5.一种重组抗冻蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以pET-28a为载体，利用NdeI/XhoI双酶切位点将权利要求2或3所述的抗冻蛋白编码基因插入到pET-28a克隆载体上，得到重组载体；
(2)将步骤(1)得到的测序正确的重组载体转入宿主菌中，然后加入IPTG诱导表达，诱导结束后，经纯化分离获得重组抗冻蛋白AFPIII。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，在插入到pET-28a克隆载体上的抗冻蛋白编码基因的N端有His标记。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的诱导表达的条件是：IPTG 0.5-2mM，35℃-37℃诱导3-6h。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的诱导表达的条件是：IPTG 1mM37℃诱导4小时。
9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述宿主菌为大肠杆菌。
10.权利要求1所述的重组蛋白作为生物冷冻保护剂之应用。
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