[发明专利]抗NMDAR抗体检测试剂

权利要求书

1.抗NMDAR抗体检测试剂，该试剂包括载片试剂、荧光标记的二抗、磷酸盐缓冲液，其特征在于所述的载片试剂包括表达标记荧光蛋白的NMDAR转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞；荧光标记的二抗与表达荧光蛋白的转染细胞中的所述的荧光为不同色系的荧光。

2.如权利要求1所述的抗NMDAR抗体检测试剂，其特征在于所述的表达标记荧光蛋白的NMDAR转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞分别固定在载片的同一面上不同区域。

3.如权利要求1所述的抗NMDAR抗体检测试剂，其特征在于所述的荧光标记的二抗选自山羊抗人IgG、小鼠抗人IgG、兔抗人IgG、驴抗人IgG、马抗人IgG或鸡抗人IgG。

4.如权利要求1所述的抗NMDAR抗体检测试剂，其特征在于所述的荧光标记的二抗中的使用的荧光物选自异硫氰酸荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明异硫氰酸盐、Texas Red、藻红蛋白、碘化丙啶、Alexa Fluor系列、Dylight系列、iFluor、PE或Cy系列。

5.如权利要求1所述的抗NMDAR抗体检测试剂，其特征在于所述的荧光蛋白选自红色荧光蛋白、橙色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、绿色荧光蛋白、青色荧光蛋白或蓝色荧光蛋白。

6.如权利要求1-5任一项所述的抗NMDAR抗体检测试剂的制备方法包括：

1）在平板基质上分别培养表达标记荧光蛋白的NMDAR转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞；

2）将培养好的细胞去除培养基，使用磷酸盐缓冲液清洗；

3）加入固定液将细胞固定；

4）将固定好的细胞使用封片液封片，干燥；

5）将干燥后的载有细胞的平板基质转移至载片上，用无影胶固定。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述的固定液选自醛类、甲醇、乙醇、丙酮、四氧化锇、苦味酸、氯仿、铬酸、升汞、重铬酸中的一种或或多种制备成的溶液；所述的封闭液选自聚乙二醇类、BSA、SlowFade Diamond、SlowFade Gold、甘油、石蜡、明胶、芦荟凝胶、防淬灭剂、矿物油中的一种或多种。

8.如权利要求1-5任一项所述的抗NMDAR抗体检测试剂的检测方法包括如下步骤：

1）准备血清、血浆或脑脊液样本，取稀释后样本加入载片反应区内；

2）37℃温育或者4℃过夜；

3）用PBS洗涤；

4）将PBS充分沥干，取荧光标记二抗加入载片反应区内，37℃温育；

5）用PBS洗涤；

6）向反应区内加入PBS；

7）将载片置于荧光显微镜下镜检。

9.如权利要求8所述的抗NMDAR抗体检测试剂的检测方法，其特征在于利用荧光显微镜观察荧光斑点及荧光斑点组合，通过判定荧光斑点的位置能否重叠以及荧光特征是否一致，判定样本中是否含有抗NMDAR抗体；通过样本的稀释倍数及斑点的强度，可对样本中抗NMDAR抗体进行定性或半定量检测分析。

10.一种如权利要求1-5任一项所述的检测试剂在制备自身免疫性脑炎自身抗体检测试剂的应用。