[发明专利]抗NMDAR抗体检测试剂

说明书

本发明提供了抗NMDAR抗体检测试剂，该试剂包括载片试剂、荧光标记的二抗、磷酸盐缓冲液，其特征在于所述的载片试剂包括表达标记荧光蛋白的NMDAR转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞；荧光标记的二抗与表达荧光蛋白的转染细胞中的所述的荧光为不同色系的荧光。通过不同色系的荧光及荧光组合，应用于判定样本中是否含有目标抗体，从而提高了抗体检测的准确性。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及抗NMDAR抗体检测试剂。

背景技术

自身免疫性脑炎（autoimmune encephalitis，AE）泛指一类由自身免疫机制介导的脑炎。AE为罕见疾病，估计每百万人口的年发病率为1-5例，其中，非裔美国人的发病率高于白种人。目前AE患病比例占脑炎病例的10%～20%，以抗N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）脑炎最常见，约占AE患者的80%。

AE强调早诊断早治疗，缩短病程，从而改善认知及临床结局，但由于其病因复杂，症状特异性不高，在诊断上存在较多的困难，其相关抗体包括抗细胞内抗原和抗细胞表面抗原两类，特异性很高；部分抗体对体内潜在肿瘤的发生有很强的提示作用，并且可帮助判断治疗和预后，因此，AE相关抗体的实验室检查对AE的诊治具有重要作用。目前抗NMDAR抗体检测时采用单色荧光，单色荧光在检测时容易导致假阳性，降低了检测的准确性。

发明内容

为解决上述检测中存在的问题，提高抗NMDAR抗体检测的准确性，本发明提供了抗NMDAR抗体检测试剂。通过不同色系的荧光及荧光组合，判定不同色系的荧光斑点是否叠加以及荧光特征是否一致，应用于判定样本中是否含有目标抗体，从而提高了抗体检测的准确性，同时可对抗NMDAR抗体进行定性或这半定量。

本发明的还一个目的在于提供抗NMDAR抗体的检测在诊断自身免疫性脑炎诊断试剂或试剂盒中的应用，所述自身免疫性脑炎诊断试剂或试剂盒用于诊断不同级别的自身免疫性脑炎和/或监测自身免疫性脑炎的进展。

抗NMDAR抗体检测试剂，该试剂包括载片试剂、荧光标记的二抗、磷酸盐缓冲液，其特征在于所述的载片试剂包括表达标记荧光蛋白的NMDAR转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞；荧光标记的二抗与表达荧光蛋白的转染细胞中的所述的荧光为不同色系的荧光。

进一步的，所述的表达标记荧光蛋白的NMDAR转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞分别固定在载片的同一面上不同区域。

进一步的，所述的荧光标记的二抗选自山羊抗人IgG、小鼠抗人IgG、兔抗人IgG、驴抗人IgG、马抗人IgG或鸡抗人IgG。

进一步的，所述的荧光标记的二抗中的使用的荧光物选自异硫氰酸荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明异硫氰酸盐、Texas Red、藻红蛋白、碘化丙啶、Alexa Fluor系列、Dylight系列、iFluor、PE或Cy系列。

进一步的，所述的荧光蛋白选自红色荧光蛋白、橙色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、绿色荧光蛋白、青色荧光蛋白或蓝色荧光蛋白。

进一步的，所述的抗NMDAR抗体检测试剂的制备方法包括：

1）在平板基质上分别培养表达标记荧光蛋白的NMDAR转染细胞和表达标记荧光蛋白的空白载体转染细胞；

2）将培养好的细胞去除培养基，使用磷酸盐缓冲液清洗；

3）加入固定液将细胞固定；

4）将固定好的细胞使用封片液封片，干燥；

5）将干燥后的载有细胞的平板基质转移至载片上，用无影胶固定。

进一步的，所述的固定液选自醛类、甲醇、乙醇、丙酮、四氧化锇、苦味酸、氯仿、铬酸、升汞、重铬酸中的一种或或多种制备成的溶液。