[发明专利]用于防治黄瓜枯萎病的芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种防治黄瓜枯萎病的芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括：

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ZR-2，其保藏编号为CGMCC NO. 21124；和，

解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）ZR-3，其保藏编号为CGMCC NO.21123。

2.根据权利要求1所述的芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括：

枯草芽孢杆菌ZR-2 1.5×10⁸-2.0×10¹⁰cfu/mL；

解淀粉芽孢杆菌ZR-3 3.5×10⁸-2.0×10¹⁰cfu/mL；

总菌数为2×10¹⁰-4×10¹⁰cfu/mL。

3.根据权利要求1所述的芽孢杆菌菌剂，其特征在于，由如下组分组成：

枯草芽孢杆菌ZR-2 7.5×10⁹-1.0×10¹⁰cfu/mL；

解淀粉芽孢杆菌ZR-3 2.5×10⁹-0.5×10¹⁰cfu/mL；

总菌数为1.0×10¹⁰-1.5×10¹⁰cfu/mL。

4.权利要求1~3中任一项所述的芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，包括：

将枯草芽孢杆菌ZR-2和解淀粉芽孢杆菌ZR-3进行高密度混合发酵培养，获得芽孢杆菌菌剂。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在所述高密度混合发酵培养中所使用的液体培养基为如下质量百分比的组分：

玉米糖浆粉10-20%、豆饼粉4-8%、蛋白胨1-5%、磷酸氢二钾0.8-1.2‰，余量为水。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在所述高密度混合发酵培养中，在起始0-24小时内，进行间隔通气，保持在有氧条件下发酵，通气量1：0.8-1.5，控制发酵溶解氧为10-20%；搅拌转速100-200r/min，搅拌间隔时间1-2小时，搅拌1-3分钟；温度为25-35℃。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在所述高密度混合发酵培养中，在起始0-24小时内，进行间隔通气，保持在有氧条件下发酵，通气量1：0.8-1.5，控制发酵溶解氧为10-20%；搅拌转速100-200r/min，搅拌间隔时间1-2小时，搅拌1-3分钟；温度为25-35℃。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在进行所述高密度混合发酵培养前，先将枯草芽孢杆菌ZR-2和解淀粉芽孢杆菌ZR-3分别进行如下培养：

1).斜面培养：将枯草芽孢杆菌ZR-2、解淀粉芽孢杆菌ZR-3两种原始菌种在无菌条件下分别接种于固体培养基上，25℃-35℃条件下，培养1-3天，使菌种活化；

2).一级种子培养：将步骤1)活化的菌种在无菌条件下分别接种于液体培养基，25℃-35℃条件下，摇床培养1-2天，制得一级种子；

3).二级种子培养：按液体培养基的体积比为5-10%的接种量，将一级种子分别接种于发酵罐中，25℃-35℃条件下，搅拌速度为100-200r/min，通气量为1：0.8-2.0，培养1-2天，制得二级种子。