[发明专利]一种抗猪肺炎支原体高免血清及其制备方法

权利要求书

1.一种抗猪肺炎支原体高免血清，其特征在于，其以保藏编号为CGMCC No.4545的猪肺炎支原体DJ-166菌株制备的灭活疫苗为免疫原，并从免疫兔中分离血清制得。

2.根据权利要求1所述的抗猪肺炎支原体高免血清，其特征在于，所述猪肺炎支原体DJ-166株灭活疫苗为将所述猪肺炎支原体DJ-166株灭活与油佐剂乳化制备而成。

3.一种制备权利要求1或2所述高免血清的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）免疫：以保藏编号为CGMCC No.4545的所述猪肺炎支原体DJ-166株的灭活疫苗为免疫原进行健康大白兔的免疫；

（2）采血：于免疫完成后14-21天，检测抗体效价，当所述琼扩抗体效价≥1：16时即为合格，对大白兔进行采血；

（3）血清分离：将采集的兔血进行培养，经固液分离收集血清，备用；

（4）血清纯化：将收集的血清样品离心并收集上清液，采用protein A亲和柱进行纯化，收集目的峰位置的纯化样品，即得。

4.根据权利要求3所述高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述免疫步骤具体包括：第一次免疫为肌肉注射，免疫剂量3-5ml；在第一次免疫后14日进行第二次免疫，免疫剂量3-5ml，并分两点注射；在第二次免疫后14日进行第三次免疫，免疫剂量3-5ml，并分两点注射。

5.根据权利要求4所述高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述兔血培养的步骤包括先后于37℃放置1-2h的步骤，以及于4℃放置4h-24h的步骤。

6.根据权利要求5所述高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述protein A亲和柱纯化步骤中，以10-20mmol/L PB溶液平衡柱子，并以100-300mmol/L柠檬酸钠溶液进行洗脱。

7.根据权利要求6所述高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述步骤（4）中，还包括在所述纯化样品中加入pH7.5-8.5的Tris-NaCl调节液的步骤。

8.根据权利要求7所述高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述protein A亲和柱纯化步骤具体包括：将血清用冰冷的10-20mmol/L PB溶液稀释5倍，备用；用冰冷的10-20mmol/L PB溶液平衡2.5ml的protein A亲和柱10-20个柱体；随后将20ml稀释的样品上柱结合；上样完毕用冰冷的10-20mmol/L PB溶液平衡2.5ml的protein A亲和柱10-20个柱体；再用100-300mmol/L柠檬酸钠溶液洗脱，每个组分收集1ml，收集完毕，立即加入PH8.0的Tris-NaCl调节混匀即可。

9.根据权利要求3-8任一项所述高免血清的制备方法，其特征在于，所述方法还包括将所述高免血清进行冻干的步骤，即将收集血清样品除菌，并加入冻干保护剂进行冻干处理，得到血清冻干产品。

10.根据权利要求9所述高免血清的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂包括明胶、蔗糖、海藻糖、甘露糖或小牛血清白蛋白中的一种或几种的混合物；

所述冻干保护剂的加入量占所述血清冻干产品总量的10-40wt%。