[发明专利]一种抗猪肺炎支原体高免血清及其制备方法

说明书

本发明属于生物血清制备技术领域，具体涉及一种抗猪肺炎支原体高免血清，并进一步公开其制备方法。本发明所述抗猪肺炎支原体高免血清，其以保藏编号为CGMCC No.4545的猪肺炎支原体DJ‑166菌株制备的灭活疫苗为免疫原，并从免疫兔中分离血清制得，其物理性状良好，加稀释液后可迅速溶解，无细菌、霉菌和支原体生长，无外源病毒污染；本发明所述高免血清来源于兔体，作为一种标准血清特异性抗体在特异性检验中，与猪肺炎支原体呈阳性反应，与猪鼻支原体抗原和猪絮状支原体抗原呈阴性反应；且‑40℃以下保存，有效期为36个月，具有特异性强、稳定性好的优势，可用于制备猪肺炎支原体试剂和标准物质。

技术领域

本发明属于生物血清制备技术领域，具体涉及一种抗猪肺炎支原体高免血清，并进一步公开其制备方法。

背景技术

猪支原体肺炎（Mycoplasma Pneumoniae of swine，MPS）俗称猪喘气病，又称猪地方流行性肺炎，是一种由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhy）引起的一种高发病率、低死亡率的猪慢性接触性呼吸道传染病。MPS广泛分布于世界各地，大多数养猪国家均有报道此病发生，猪群中Mhy感染率为30%-90%，主要表现为咳嗽和气喘，肺部呈现暗红色至灰色的“肉样”或“胰样”实变。猪支原体肺炎一般患猪死亡率不高，其主要危害是引起猪的生长受阻和饲料转化率大幅下降，长期生长发育不良，严重影响养猪业的经济效益。

目前，免疫接种猪肺炎支原体疫苗是防控MPS的重要措施之一，也是控制猪支原体肺炎最有效的方法，可有效减少肺部损失、提高饲料转化率、缩短出栏时间。通常在疫苗免疫后，效力实验的评价方法中，猪免疫攻毒实验是最有效的手段。但是，通常实验猪筛选较为困难，且人工费、饲养费成本高，实验时间也长达两个月。因此，寻找一种纯度高、特异性强、稳定性好的检测抗体，以体外相对效力检测方法代替动物攻毒实验，以实现便捷经济的体外效力检测，对于猪肺炎支原体疫苗的接种具有积极的意义。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种纯度高、特异性强、稳定性好的猪肺炎支原体高免血清检测抗体，可用于猪肺炎支原体疫苗的体外评价；

本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述猪肺炎支原体高免血清的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种抗猪肺炎支原体高免血清，其以保藏编号为CGMCC No.4545的猪肺炎支原体DJ-166菌株制备的灭活疫苗为免疫原，并从免疫兔中分离血清制得。

具体的，所述猪肺炎支原体DJ-166株灭活疫苗为将所述猪肺炎支原体DJ-166株灭活与油佐剂乳化制备而成。

本发明还公开了一种制备所述高免血清的方法，包括如下步骤：

（1）免疫：以保藏编号为CGMCC No.4545的所述猪肺炎支原体DJ-166株的灭活疫苗为免疫原进行健康大白兔的免疫；

（2）采血：于免疫完成后14-21天，检测抗体效价，当所述琼扩抗体效价≥1：16时即为合格，对大白兔进行采血；

（3）血清分离：将采集的兔血进行培养，经固液分离收集血清，备用；

（4）血清纯化：将收集的血清样品离心并收集上清液，采用protein A亲和柱进行纯化，收集目的峰位置的纯化样品，备用；

（5）冻干：将收集血清样品除菌，并加入冻干保护剂进行冻干处理，即得。

具体的，所述步骤（1）中，所述免疫步骤具体包括：第一次免疫为肌肉注射，免疫剂量3-5ml；在第一次免疫后14日进行第二次免疫，免疫剂量3-5ml，并分两点注射；在第二次免疫后14日进行第三次免疫，免疫剂量3-5ml，并分两点注射。

具体的，所述步骤（3）中，37℃放置1-2h的步骤，以及于4℃放置4h-24h的步骤。