[发明专利]一种低分子量苜蓿多糖及其制备方法与调节肠道菌群的应用

说明书

本发明公开了一种低分子量苜蓿多糖及其制备方法与调节肠道菌群的应用，低分子量苜蓿多糖的分子量为3~6 KDa，单糖组成包括0.75~1.16%甘露糖、68.57~81.02%葡萄糖、1.10~4.53%半乳糖；通过纤维素酶提取、Sevage试剂脱蛋白、棉絮状DEAE‑52纤维素脱色、颗粒状DEAE‑52纤维素分离纯化制备得到；具有调节肠道菌群的作用，促进双歧杆菌、乳酸菌等益生菌的增长，抑制柠檬酸杆菌、埃希菌等致病菌的生长，并酵解产生乙酸等短链脂肪酸，降低肠道的pH值。

技术领域

本发明属于植物多糖技术领域，具体涉及一种低分子量苜蓿多糖及其制备方法与调节肠道菌群的应用。

背景技术

苜蓿为豆科苜蓿属多年生草本植物，是世界上栽培面积最广的牧草品种之一；苜蓿也是一种传统的中草药，具有清热解毒、凉血通淋、益气健脾、温肾、降血脂等功效。苜蓿中含有多糖、皂苷、黄酮、多酚等生物活性成分，其中苜蓿多糖具有抗氧化、抗炎症、抗肿瘤、免疫调节等多种药理活性，还可以用于促进家禽类的生产，且毒副作用小，已成为近年来的研究热点之一。

苜蓿多糖一般采用碱提取法、水提取法或酶提取法提取，后经分离纯化得到。CN103980371A公开了一种分子量为4.5~66.6KDa，由阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸等多种单糖组成的苜蓿多糖；该苜蓿多糖通过复合酶（纤维素酶、木瓜蛋白酶和果胶酶）提取，Sevage法脱蛋白，DEAE-纤维素柱和Sephadex G-100柱层析分级纯化得到。CN110790846A公开了一种分子量为8~20KDa，由鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖和半乳糖组成的紫花苜蓿多糖；该紫花苜蓿多糖通过水提浸膏，Sevage法脱蛋白，AB-8树脂柱脱色，经过DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-200柱层析分离得到。但对于低分子量、单糖含量均一的苜蓿多糖及其在调节肠道菌群中的应用还鲜有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种低分子量苜蓿多糖及其制备方法与调节肠道菌群的应用，通过控制纤维素酶的用量制得低分子量、单糖含量均一的苜蓿多糖，该苜蓿多糖具有调节肠道菌群的作用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：一种低分子量苜蓿多糖，分子量为3~6KDa，单糖组成包括0.75~1.16%甘露糖、68.57~81.02%葡萄糖、1.10~4.53%半乳糖。

优选的，所述分子量为5~6 KDa，单糖组成包括0.75%甘露糖、81.02%葡萄糖、1.1%半乳糖。

一种低分子量苜蓿多糖的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：将苜蓿原料干燥、粉碎，石油醚回流脱脂，过滤、干燥后得苜蓿干粉。

步骤2：取步骤1所得苜蓿干粉，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，再加入纤维素酶，提取苜蓿多糖。灭酶活后离心收集上清液，浓缩、醇沉、离心，沉淀经冷冻干燥得粗制苜蓿多糖。

步骤3：将步骤2所得粗制苜蓿多糖加水溶解，加入Sevage试剂，振荡、离心脱蛋白，浓缩、醇沉、离心，沉淀得脱蛋白粗制苜蓿多糖。

步骤4：将步骤3中的脱蛋白粗制苜蓿多糖用棉絮状DEAE-52纤维素进行脱色处理，分别用水和NaCl溶液洗脱。将收集的水洗脱液浓缩、醇沉后得到脱色脱蛋白粗制苜蓿多糖。

步骤5：将步骤4所得脱色脱蛋白粗制苜蓿多糖用颗粒状DEAE-52纤维素分离纯化，用水洗脱，合并对称洗脱峰溶液，浓缩、冷冻干燥得到低分子量苜蓿多糖。

优选的，所述步骤2中苜蓿干粉与磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的料液比为1：20~30，纤维素酶用量为6~8%。

优选的，所述步骤2中苜蓿干粉与磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的料液比为1：30，纤维素酶用量为6%。