[发明专利]一种液质联用测定血浆中非洛地平浓度的方法

权利要求书

1.一种液质联用测定血浆中非洛地平浓度的方法，其特征在于：血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以非洛地平-d3为内标；于96深孔板中精密加入200μL的血浆样本，加入10μL体积比为1：1的乙腈水溶液，混匀后加入10μL的0.08ng/μL的内标非洛地平-d3溶液，混匀后加入800μL的乙腈，涡旋混合10min，于20℃以4000rpm离心10min，取上层清液700μL至另一96深孔板中，于纯净氮气流下，40℃蒸发干燥至少30min后，再向96深孔板中加入250μL混合有机溶剂，涡旋混匀10min，于20℃以4000rpm离心5min后作为测试样本待检测；其中：混合有机溶剂为乙腈：水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比55：45：0.2：0.1混合得到的混合溶液；以上过程均需在黄光条件下进行操作；

(2)试样测定：

取20μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中非洛地平和内标非洛地平-d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的非洛地平浓度；

液相色谱测定条件为：色谱柱为Waters Xbridge-C18，柱规格为2.1×50mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积百分比100：0.2：0.1混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸：1M醋酸铵按照体积百分比100：0.2：0.1混合得到的混合物；洗液为乙腈：水按照体积百分比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为20μL，分析时间3.5min；

质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5500V，雾化温度为400℃，喷雾气压力为60Psi，辅助加热气压力为40Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，非洛地平和非洛地平-d3的去簇电压均为35eV；非洛地平和非洛地平-d3的碰撞室入口电压均为12eV；非洛地平和非洛地平-d3的碰撞电压均为19eV；非洛地平和非洛地平-d3的碰撞室出口电压均为11eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z 384.2→m/z 352.0，其为非洛地平；和m/z 387.2→m/z 351.9，其为非洛地平-d3。

2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中非洛地平浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为：

3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中非洛地平浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以非洛地平和内标非洛地平-d3的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的非洛地平的浓度。