[发明专利]一种液质联用测定血浆中非洛地平浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中非洛地平浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样本，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为非洛地平的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.02～4ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中非洛地平的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中非洛地平浓度的方法。

背景技术

非洛地平是治疗高血压的有效药物，这种片剂既可单独使用或与其他抗高血压药物合并使用。高血压是引起动脉粥样硬化和血管重塑的重要危险因素之一，高血压与内皮舒张功能障碍之间存在密切关系。近代高血压的治疗目标强调降压的同时，应注重逆转血管的重塑，改善血管内皮细胞功能保护或恢复受损的内皮功能，从而大大减少临床心脑血管病的发生。

非洛地平缓释片是属于钙通道阻滞剂又称钙拮抗剂，而缓释片属于长效制剂，非洛地平缓释片具有降血压的作用，降压作用主要通过阻滞细胞外钙离子经电压依赖L型钙通道进入血管平滑肌细胞内，减弱兴奋-收缩偶联，降低阻力血管的收缩反应性。

非洛地平缓释片有较好的降压疗效，高纳摄入不影响降压疗效，还具有抗动脉粥样硬化的作用，使用后会引起心率增快、面部潮红、头痛下肢水肿等不良反应。目前，现有关于非洛地平测定方法的速度、精度、灵敏度、选择性均有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中非洛地平浓度的方法，该方法可提高检测的灵敏度、精度、选择性和速度。

为实现上述目的，本发明提供一种液质联用测定血浆中非洛地平浓度的方法，血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以非洛地平-d3为内标；于96深孔板中精密加入200μL的血浆样本，加入10μL体积比为1：1的乙腈水溶液，混匀后加入10μL的0.08ng/μL的内标非洛地平-d3溶液，混匀后加入800μL的乙腈，涡旋混合10min，于20℃以4000rpm离心10min，取上层清液700μL至另一96深孔板中，于纯净氮气流下，40℃蒸发干燥至少30min后，再向96深孔板中加入250μL混合有机溶剂，涡旋混匀10min，于20℃以4000rpm离心5min后作为测试样本待检测；其中：混合有机溶剂为乙腈：水：甲酸：1M醋酸铵混合得到的混合溶液；以上过程均需于黄光条件下操作；

(2)试样测定：

取20μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中非洛地平和内标非洛地平-d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的非洛地平浓度。

液相色谱测定条件为：色谱柱为Waters Xbridge-C18，柱规格为2.1×50mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积百分比100：0.2：0.1混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸：1M醋酸铵按照体积百分比100：0.2：0.1混合得到的混合物；洗液为乙腈：水按照体积百分比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为20μL，分析时间3.5min；