[发明专利]一种抗原抗体共展示方法用于膜抗原的抗体文库筛选

权利要求书

1.一种针对膜抗原的抗体文库筛选方法，所述方法包括以下步骤：

(1)构建抗原模块表达载体，所述抗原模块表达载体为酵母表达载体，所述抗原模块表达载体中含有抗原模块编码基因，所述抗原模块编码基因包括目标抗原编码基因序列和第一胞内效应蛋白结构域编码基因序列的融合序列，所述目标抗原为膜抗原；

(2)构建抗体模块表达载体，所述抗体模块表达载体为酵母表达载体，所述抗体模块表达载体中含有抗体模块编码基因，所述抗体模块编码基因包括针对目标抗原的抗体编码基因序列、跨膜肽编码基因序列、以及第二胞内效应蛋白结构域编码基因序列的融合序列，所述第二胞内效应蛋白结构域适于与所述第一蛋白效应蛋白结构域结合形成效应蛋白；

(3)将步骤(1)获得的抗原模块表达载体和步骤(2)获得的抗体模块表达载体分别转入宿主菌进行杂交，根据所述效应蛋白产生的理化效应筛选阳性克隆，获得抗原特异性抗体文库。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下技术特征中任一种或几种：

a)所述跨膜肽选自酵母菌蛋白ALG5(2～25aa)、酵母菌蛋白PHO90(533～565aa)或小鼠CXCR5(162～194aa)蛋白中任一；

b)所述效应蛋白选自连接有报告基因转录因子的泛素蛋白、荧光蛋白或萤光素酶；优选的，所述报告基因转录因子为GAL4；

c)所述抗体编码基因序列表达的抗体位于跨膜肽的C端；

d)步骤(3)中，所述宿主菌选自Y187细胞株或AH109菌株中任一；

e)步骤(3)中，所述宿主菌为酵母，优选的，所述抗原模块表达载体和抗体模块表达载体分别转入不同结合型酵母；

f)所述抗原模块编码基因还包括信号肽编码基因，所述信号肽编码基因与目标抗原编码基因连接。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一胞内效应蛋白结构域选自荧光蛋白C端或N端结构域、泛素蛋白C端或N端结构域、或萤光素酶N端或C端结构域中任一，所述第二胞内效应蛋白结构域包括适于与所述第一胞内效应蛋白结合形成荧光蛋白、泛素蛋白或萤光素酶的结构域；优选地，第一胞内效应蛋白结构域选自泛素蛋白C端或N端结构域，所述第一或第二胞内效应蛋白结构域末端连接转录因子GAL4，更优选地，所述泛素蛋白N端结构域氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗原模块编码基因中，目标抗原编码基因序列和第一胞内效应蛋白结构域编码基因序列之间通过连接肽连接；所述抗体模块编码基因中，抗体编码基因序列、跨膜肽编码基因序列、以及第二胞内效应蛋白结构域编码基因序列之间依次通过连接肽连接。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述抗体编码基因表达产物为Fab形式时，所述抗体模块表达载体包括：

a)轻链模块表达载体：所述轻链表达载体包括轻链编码基因序列、跨膜肽编码基因序列、以及第二胞内效应蛋白结构域编码基因序列的融合序列；

b)重链模块表达载体：所述重链表达载体包括重链编码基因序列和恒定区1区序列的融合序列；

步骤3)包括：将转化有抗原及抗体重链表达模块的第一酵母菌株A，与转化有轻链模块表达载体的第二酵母菌株B杂交。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述抗体编码基因表达产物为scFv形式时，所述抗体模块表达载体包括：

抗体模块编码基因，所述抗体模块编码基因是针对目标抗原的抗体编码基因序列、跨膜肽编码基因序列、以及第二胞内效应蛋白结构域编码基因序列的融合序列。