[发明专利]一种当归早期抽薹种子的鉴定方法

说明书

本发明涉及一种当归早期抽薹种子的鉴定方法，其步骤包括a．种子取样准备；b．培养基制备；c．当归种子内生菌的提取和分离培养；d．当归种子内生菌菌落鉴定。利用本发明可以快速准确鉴定当归早期抽薹种子，甄别种子真伪，保护当归优质种子在生产上的应用，促进道地产区中药材当归的可持续化生产。

技术领域

本发明涉及地道药用植物当归种子的鉴定，特别涉及一种当归早期抽薹种子的鉴定方法。

背景技术

当归（Angelica sinensis）为伞形科当归属多年生草本药用植物，具有补血活血等多种功效（中国药典，2020），甘肃岷县一带是当归的优质道地产区，也是“中国当归之乡”，年产量占全国总产量的90%以上。当归已作为药食同源中药材物质使用。我国野生当归分布不均且稀少，药源主要为栽培品。然而，随着种植年限延长，加上全球气候变暖，当归早期抽薹率逐年提高，道地生态区减缩。当归栽培期为3年，第1年为育苗期，第2年为成药栽培期，第3年为繁种期。正常繁种当归成药根不采挖，留株越冬，第3年返青株正常抽薹结种子。早期抽薹也称未熟抽薹，是当归在第2年成药期尚未成药而植株提早抽薹，根木质化失去药食性的一种物候现象。早期抽薹不仅是当归生产的一大障碍，还增大了田间拔除早期抽薹株的劳动强度，大幅增加了生产成本。一般认为田间抽薹率为10%～20%属于正常现象，但目前达40%，甚至达60%～80%，产量几乎绝收，严重影响当归的栽培成效。我们调查发现在相同栽培条件下有一定比例的植株成药并完成正常生活史，说明当归个体物候存在差异。因此，选育冬性强、耐早期抽薹的当归品种才是缓解早期抽薹问题的有效途径，但目前缺乏鉴别指标，选种盲目性大。种子作为一个生物系统，包含其性能特性。种子混杂导致种性退化加速。我们发现早期抽薹种性繁殖力更强，冬性弱，后世代全部早期抽薹。市售当归种子参混使早期抽薹问题更为严峻，从种源鉴定早期抽薹特性显得至关重要。植物内生菌（Endophyte）是植物体内的微生物类群，在与宿主长期互利共生过程中可能产生与宿主相同功能的种群特异性。当归成药栽培期，早期抽薹株在田间返青初期无任何形态迹象，随着个体发育才逐渐显露，说明早期抽薹与种性及其内生菌的协同作用有密切关系，但至今有关当归种子内生菌的研究尚未见报道。因此，本发明从当归早期抽薹种子和正常成熟种子内生细菌菌落的比较研究中探寻出一种当归早期抽薹种子的鉴定方法，可为当归耐抽薹新品种选育和当归种子真伪鉴定提供科学有效的鉴定方法。

发明内容

鉴于上述，本发明的目的在于提供一种当归早期抽薹种子的鉴定方法，以便快速检测早期抽薹种子。本方法采用种子内生细菌提取及菌落分离培养鉴定，效果良好，能够快速鉴定当归早期抽薹种子。

为了实现所述目的，本发明所采取的技术方案是：

一种当归早期抽薹种子鉴定方法，其步骤是：

1．种子取样准备

①种子取样：在市售种子中随机抽样，剔除杂质和病虫种子；

②种子贮藏：将a.①种子样品装入纸袋，外套自封袋，内加吸水纸，置4 ℃冰箱备用；

2．培养基制备

①营养培养基配置：准确称取牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g和琼脂15g，用蒸馏水定容至体积1000 ml；

②培养皿准备；选择规格一致的培养皿，洗净烘干备用；

③培养基分装与灭菌；将b.①制备好的培养基分装入②培养皿，每皿装入30 ml培养基，高压灭菌后备用；

3．当归种子内生菌的提取和分离培养

①种子表面灭菌：首先将a.②当归种子去除果皮和果柄，用流水冲洗干净，无菌条件下干燥后称取当归种子1 g，用流水冲洗10 min，置超净工作台用无菌水冲洗3～4次，再用75%的乙醇表面灭菌1 min，再用无菌水冲洗3～4次，最后用2.5%的NaClO充分震摇处理10min，随后无菌水再次冲洗3～4次，以确保当归种子表面不带菌，最后冲洗的无菌水收集于无菌培养皿中，备用于检测带菌情况；