[发明专利]一种连续发酵驯化丝状真菌的方法

权利要求书

1.一种连续发酵驯化高山被孢霉的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）发酵至菌浓度稳定时，排出发酵液，同时补充碳源、氮源、维生素、无机盐，逐渐形成筛选发酵体系；

所述氮源为磷酸氢二铵、氨水、硫酸铵、尿素、硝酸铵、硝酸钾、谷氨酸或其盐、甘氨酸或其盐、缬氨酸或其盐、脯氨酸或其盐、色氨酸或其盐、组氨酸或其盐中的一种或多种；

（2）驯化过程中，以葡萄糖计，碳源维持在5-20g/L；以总氮浓度计，氮源浓度在0.1-1g/L；pH为5.5-8.5，发酵液体积维持不变。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述维生素为维生素B1、维生素B2、维生素B5、生物素、胆碱、肌醇、烟酸中的一种或多种；

所述无机盐为氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸锌、氯化钠中的一种或多种。

3.一种驯化高山被孢霉的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）发酵至菌浓度稳定在40-60%时，排出发酵液，补料添加碳源、无机氮源、氨基酸、维生素、无机盐，逐渐形成筛选发酵体系；

（2）驯化过程中，以葡萄糖计，碳源维持在5-20g/L；以总氮量计，氮源浓度为0.1-1g/L；pH为5.5-8.5；且维持发酵液体积不变；

（3）当发酵罐中发酵液菌浓度重新稳定在40-60%时，得到利用特定氮源的高山被孢霉菌株。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（1）中每小时排出发酵液的体积是V/1000-V/500，其中V为发酵液的初始体积。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述筛选发酵体系中，所述无机氮源为磷酸氢二铵。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述筛选发酵体系中，所述氨基酸组分为0.01-0.3g/L谷氨酸或其盐、0.01-0.1g/L甘氨酸或其盐、0.01-0.1g/L缬氨酸或其盐、0.01-0.2g/L脯氨酸或其盐、0.01-0.2g/L色氨酸或其盐和0.01-0.2g/L组氨酸或其盐；所述维生素为5-30ppm维生素B1、5-30ppm维生素B2、5-30ppm维生素B5、5-30ppm生物素、1500-3000ppm胆碱、1500-3000ppm肌醇和200-500ppm烟酸；所述无机盐为0.1-1g/L氯化钙、0.1-1g/L硫酸镁、0.5-5g/L磷酸二氢钾、0.01-0.5g/L硫酸亚铁、0.01-0.5g/L硫酸锌和0.1-1g/L氯化钠。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2）中搅拌速度为200-300转/分钟、通气量为1-2 vvm、罐压为0.05-0.15 Mpa。

8.一种高山被孢霉的培养基，其特征在于，所述培养基的成分为：30-60 g/L碳源、10-30g/L磷酸氢二铵、0.05-0.4g/L谷氨酸或其盐、0.05-0.2g/L甘氨酸或其盐、0.05-0.2g/L缬氨酸或其盐、0.01-0.2g/L脯氨酸或其盐、0.01-0.2g/L色氨酸或其盐、0.01-0.2g/L组氨酸或其盐、5-30ppm维生素B1、5-30ppm维生素B2、5-30ppm维生素B5、5-30ppm生物素、1500-3000ppm胆碱、1500-3000ppm肌醇、200-500ppm烟酸、0.1-1g/L氯化钙、0.1-1g/L硫酸镁、0.5-5g/L磷酸二氢钾、0.01-0.5g/L硫酸亚铁、0.01-0.5g/L硫酸锌和0.1-1g/L氯化钠。

9.权利要求1-7任一项所述的方法、或权利要求8所述的培养基在驯化无需除氨基酸之外的有机氮源的高产ARA的高山被孢霉菌株中的应用。