[发明专利]一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法

权利要求书

1.一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)10×TAE缓冲液的配制：向1L烧杯中加入600mL蒸馏水，分别称取48.4g Tris和3.7g二水合乙二胺四乙酸二钠溶于蒸馏水中，充分搅拌均匀；在混合溶液中加入11.4mL乙酸，充分搅拌均匀；加蒸馏水定容至1L，室温下保存于棕色瓶中；

(2)1×TAE缓冲液的配制：向1L烧杯中加入900mL蒸馏水，加入100mL步骤(1)中的10×TAE缓冲液，充分混匀，室温下保存于棕色瓶中；

(3)琼脂糖凝胶的制备：将琼脂糖溶于步骤(2)的1×TAE缓冲液中，置微波炉中加热至完全溶化，取出搅拌均匀；

(4)灌胶：将步骤(3)中的琼脂糖凝胶中放入温度计，待琼脂糖凝胶冷却至50-58℃，倒入电泳槽水平板中；

(5)样品固定：待步骤(4)中琼脂糖凝胶温度降低，用胶头滴管将枝角类个体由养殖水体中转移至琼脂糖凝胶中，直至琼脂糖凝胶冷却；

(6)样品分离：将步骤(5)中含有枝角类样品的琼脂糖凝胶切成立方体；

(7)显微测量：将步骤(6)中的立方体置于光学显微镜下，体宽面向上，并拍照，同时在相同倍镜下对1mm标尺进行拍照，最后利用软件ImageJ对照片中的壳间距m进行测量。

2.根据权利要求1所述的一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法，其特征在于，步骤(3)中，所述琼脂糖质量为0.5-0.6g；所述1×TAE缓冲液体积为30-40mL。

3.根据权利要求1所述的一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法，其特征在于，步骤(4)中，所述琼脂糖凝胶冷却温度为55℃。

4.根据权利要求1所述的一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法，其特征在于，步骤(5)中，所述温度降低为温度降至38℃。

5.根据权利要求1所述的一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法，其特征在于，步骤(5)中，所述胶头滴管规格为90mm或100mm。

6.根据权利要求1所述的一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法，其特征在于，步骤(6)中，所述立方体分别以枝角类的体长X、壳宽Y和体宽Z为边长切割，每个立方体中含有一个枝角类个体。