[发明专利]一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法

说明书

本发明属于水产养殖技术领域，本发明公开了一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法，将琼脂糖溶于1×TAE缓冲液中制备琼脂糖凝胶，并在琼脂糖凝胶温度为38℃时将枝角类个体转移至琼脂糖凝胶中，冷却形成凝胶，并以枝角类的体长X、壳宽Y和体宽Z为边长，将琼脂糖凝胶切成立方体，每个立方体中含有一个枝角类个体，将该立方体置于光学显微镜下，体宽面向上拍照，同时在相同倍镜下对1mm标尺进行拍照，利用软件ImageJ对照片中的壳间距m进行测量。本发明测量方法改变了单纯对枝角类进行平面测量的传统测量方式，利用38℃的琼脂糖凝胶固定枝角类并不会影响其壳瓣的形态特征，为枝角类的养殖和研究提供了方便实用的观察测量方法。

技术领域

本发明涉及水产养殖技术领域，尤其涉及一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法。

背景技术

枝角类，隶属于节肢动物门(Arthropoda)，甲壳纲(Crustacea)，鳃足亚纲(Branchiopoda)，枝角目(Cladocera)，广泛分布于淡水、海水和内陆半咸水中。随着生活水平的逐步提高，人们对水产品的需求日益增大，这使得水产养殖业得到了持续的发展。枝角类作为水产鱼类重要的开口饵料，正越来越被人们关注和重视，因此，开展枝角类的人工增养殖及饲喂饵料的筛选则显得尤为重要。

枝角类主要滤食水中浮游的单细胞藻类，对控制水体中的蓝绿藻也具有一定作用。但是，该物种由于左右壳瓣间距的限制，无法摄食直径大于其间距的藻类，因此，在开展枝角类人工增养殖的时候，对养殖物种的左右壳瓣间距进行准确测量，有利于筛选出适合投喂的藻类，从而提高枝角类的养殖效率。

目前，国内外研究人员利用枝角类开展了大量摄食实验，但是，现有技术并未公开针对左右壳瓣间距进行准确测量的方法。因此，开发枝角类壳瓣间距的测量方法具有重要的科研和应用价值。

发明内容

由于枝角类的个体呈左右侧扁的特点，在显微拍照时只能呈现出左右侧面的扁平结构，而无法对枝角类进行立体的观察测量。针对上述问题，本发明的目的在于提供一种简单、可靠、快速、准确的枝角类壳瓣间距测量方法，解决上述现有技术的不足。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法，包括如下步骤：

(1)10×TAE缓冲液的配制：向1L烧杯中加入600mL蒸馏水，分别称取48.4g Tris和3.7g二水合乙二胺四乙酸二钠溶于蒸馏水中，充分搅拌均匀；在混合溶液中加入11.4mL乙酸，充分搅拌均匀；加蒸馏水定容至1L，室温下保存于棕色瓶中；

(2)1×TAE缓冲液的配制：向1L烧杯中加入900mL蒸馏水，加入100mL步骤(1)中的10×TAE缓冲液，充分混匀，室温下保存于棕色瓶中；

(3)琼脂糖凝胶的制备：将琼脂糖溶于步骤(2)的1×TAE缓冲液中，置微波炉中加热至完全溶化，取出搅拌均匀；

(4)灌胶：将步骤(3)中的琼脂糖凝胶中放入温度计，待琼脂糖凝胶冷却至50-58℃，倒入电泳槽水平板中；

(5)样品固定：待步骤(4)中琼脂糖凝胶温度降低，用胶头滴管将枝角类个体由养殖水体中转移至琼脂糖凝胶中，直至琼脂糖凝胶冷却；

(6)样品分离：将步骤(5)中含有枝角类样品的琼脂糖凝胶切成立方体；

(7)显微测量：将步骤(6)中的立方体置于光学显微镜下，体宽面向上，并拍照，同时在相同倍镜下对1mm标尺进行拍照，最后利用软件ImageJ对照片中的壳间距m进行测量。

优选的，在上述一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法中，步骤(3)琼脂糖质量为0.5-0.6g；1×TAE缓冲液体积为30-40mL。

优选的，在上述一种枝角类壳瓣间距的显微测量方法中，步骤(4)琼脂糖凝胶冷却温度为55℃。