[发明专利]一种检测PAT/bar蛋白的试纸条、检测卡及其制备方法和用途

说明书

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测PAT/bar蛋白的试纸条、检测卡及其制备方法和用途。所述试纸条的反应膜上设有检测线和质控线，所述检测线包被第一PAT/bar蛋白单克隆抗体，所述质控线包被羊抗兔IgG；所述试纸条的结合垫上包被有量子点标记的第二PAT/bar蛋白单克隆抗体和量子点标记的兔IgG。本发明提供的试纸条灵敏度高、准确性强、重复率好、特异性好且操作简便，可以实现对转基因植物或食品中Bar基因的定性或定量检测，为快速定性或定量检测植物、食品抗除草剂转基因成分提供技术支撑，对检测植物、食品等农产品的转基因成分以及对转基因食品安全性评价具有重要的意义。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测PAT/bar蛋白的试纸条、检测卡及其制备方法和用途。

背景技术

杂草是伴随着人类的生产活动而产生的，它们的存在是长期适应气候、土壤、作物、耕作制度及社会因素与栽培作物竞争的结果。人类从开始从事农业生产就在防治杂草，喷施除草剂是目前最为高效的方式，把人类从初级劳动中解放出来，极大的提高效率。但因为除草剂能同时导致杂草和作物死亡，带有抗除草剂基因的转基因作物商业化，便成为农业生产中最具优势的性状之一。截至2003年，抗除草剂作物占全球转基因作物的80％以上。从发展趋势上看，转基因的作物比例仍在不断增加。由于抗除草剂标记在商业化转基因植物应用广泛，随着转基因食品的快速发展，国外转基因的作物和食品大量进入中国，转基因的食品检测技术是转基因食品安全性评价的重要组成部分，其技术研究具有重要的意义。

Bialaphos是链霉菌生产的众多抗生素的一种，其化学结构包括谷氨酸异构体(phosphinothricin(PPT))和两个丙氨酸残基(-alanyle-alanine)。Bialaphos是谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase)的抑制剂。通过细胞内切酶的作用去除丙氨酸残基后生成有活性的glufosinate从而抑制谷氨酰胺合成酶的作用，最终导致高浓度的氨在生物体内(包括植物和细菌)聚集而对生物体产生毒理作用。因而，glufosinate成为一种广泛应用的非特异性选择除草剂。某些微生物能够产生一种酶通过对氨基进行乙酰化，从而解毒此效应，这种抗性基因被命名为Bar。该基因编码的蛋白可以将phosphinothricin乙酰化变成无毒形式的蛋白膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyl transferase，PAT)，该基因表达的蛋白为PAT/bar。Bar基因广泛应用于基因工程育种中，也是遗传转化中的标记基因，它使植物抵抗以L-phosphinothricin为活性成分的除草剂。

目前检测Bar基因的方法为免疫结合胶体金层析法，胶体金具有胶体的特性，容易受到电解质的影响，使胶体金凝聚成大颗粒。因此，胶体金至少具有下述缺点中的一种：①胶体金是肉眼可见的颗粒，其灵敏度较差；②胶体金与蛋白质是靠静电吸引结合在一起，有非特异干扰，容易出现假阳性；③免疫结合胶体金层析法只能用于定性检测，不能用于定量检测Bar基因。

因此，提供一种灵敏度高、能够定量检测Bar基因的方法对检测植物、食品等农产品的转基因成分以及对转基因食品安全性评价具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述不足，提供一种检测PAT/bar蛋白的试纸条、检测卡及其制备方法和用途，所述试纸条利用量子点标记抗体同时在检测线上包被PAT/bar蛋白单克隆抗体，通过对转基因植物或食品中的PAT/bar蛋白进行定性或定量分析，可以实现对所述植物或食品中Bar基因的定性或定量检测，灵敏度高，对检测植物、食品等农产品的转基因成分以及对转基因食品安全性评价具有重要的意义。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

第一方面，本发明提供了一种检测PAT/bar蛋白的试纸条，所述试纸条的反应膜设有检测线和质控线，所述检测线包被第一PAT/bar蛋白单克隆抗体，所述质控线包被羊抗兔IgG；所述试纸条的结合垫上包被有量子点标记的第二PAT/bar蛋白单克隆抗体和量子点标记的兔IgG。