[发明专利]一种多重信号放大系统及其在免疫斑点法检测中的应用

权利要求书

1.一种利用多重信号放大系统进行免疫斑点法检测的方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）固相基质上固定包被抗体或者抗原；

（2）加入待检测细胞和细胞刺激物或者直接加入已经和刺激物作用过的待检测细胞或者直接加入未经刺激物刺激的待检测细胞后作用一段时间；

（3）去除细胞和/或细胞刺激物并洗涤；加入抗体-DNA/RNA连接链或者加入抗原-DNA/RNA连接链，作用一定时间；

（4）加入DNA/RNA放大链，作用一定时间；

（5）加入DNA/RNA检测链，反应一定时间；

（6）进行洗涤，检测DNA/RNA检测链上的待检测信号强度；

（7）定量分析固相基质上所形成的具有检测信号的免疫斑点的数量；

所述DNA/RNA放大链包括以下序列：

GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)_n-ATAAACCTA-A、

CTAGATCGAACTATTCGAACACTAAATA-TT-CATCATCAT-A-(CATCATCAT-A)_n-CATCATCAT-A、

GGGTTATTGCGAGGATATAGGGCGTGGCGGTGTCATAGAATT-TT-AATACTCTC-A-(AATACTCTC-A)_n-AATACTCTC-A、

CTGTTGCGCGGGAGAACGACACGGACGCTAAATATAGGAAAC-TT-A-CAACTTAAC-A-(CAACTTAAC-A)_n-CAACTTAAC-A、

ATTGAGACGGTACGGTTCACTGCTAACGGACGATTTGGATTC-TT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)_n-TTCATTTAC-A、

GAGTATGCGTCGGAGACCTTGACGGACCTTGGACTAGACTTG-TT-CAATCAAAA-A-(CAATCAAAA-A)_n-CAATCAAAA-A、

GACGGTGAATGTACGACTATGCGACGGGATACTACAGGAACT-TT-CCAATAATA-A-(CCAATAATA-A)_n-CCAATAATA-A、

TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)_n-TTCATTTAC-A、

ATGATGATG-T-ATGATGATG-T-ATGATGATG-TTT-TTTTCTACC-A-(TTTTCTACC-A)_n-TTTTCTACC-A、

GAGAGTATT-T-GAGAGTATT-T-GAGAGTATT-TTT-TCCTTTTAT-A-(TCCTTTTAT-A)_n-TCCTTTTAT-A、

GTTAAGTTG-T-GTTAAGTTG-T-GTTAAGTTG-TTT-CCTTCTATT-A-(CCTTCTATT-A)_n-CCTTCTATT-A、

GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-TTT-TTATTCACT-A-TTATTCACT-A-(TTATTCACT-A)_n-TTATTCACT-A、

TTTTGATTG-T-TTTTGATTG-T-TTTTGATTGTTT-TCATTACTT-A-TCATTACTT-A-(TCATTACTT-A)_n-TCATTACTT-A、

TATTATTGG-T-TATTATTGG-T-TATTATTGG-TTT-TTCTTACTC-A-TTCTTACTC-A-(TTCTTACTC-A)_n-TTCTTACTC-A；

所述DNA/RNA连接链包括以下序列：

AAAUUCCUCUACCACCUACA、AAATTCCTCTACCACCTACATCAC、

TATTTAGTGTTCGAATAGTT、TATTTAGTGTTCGAATAGTTCGATCTAG、

AATTCTATGACACCGCCACGCCCTATATCCTCGCAATAACCC、

GTTTCCTATATTTAGCGTCCGTGTCGTTCTCCCGCGCAACAG、

GAATCCAAATCGTCCGTTAGCAGTGAACCGTACCGTCTCAAT、

CAAGTCTAGTCCAAGGTCCGTCAAGGTCTCCGACGCATACTC、

AGTTCCTGTAGTATCCCGTCGCATAGTCGTACATTCACCGTC、

AAAUUCCUCUACCACCUACAUCAC；

所述DNA/RNA检测链包括以下序列：

待检测信号-TT-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T、

待检测信号-TT-ATGATGATG-T-ATGATGATG-T、

待检测信号-TT-GAGAGTATT-T-GAGAGTATT-T、

待检测信号-TT-GTTAAGTTG-T-GTTAAGTTG-T、

待检测信号-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T、

待检测信号-TT-TTTTGATTG-T-TTTTGATTG-T、

待检测信号-TT-TATTATTGG-T-TATTATTGG-T、

待检测信号-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T、

待检测信号-TT-GGTAGAAAA-T-GGTAGAAAA-T、

待检测信号-TT-ATAAAAGGA-T-ATAAAAGGA-T、

待检测信号-TT-AATGAAAGA-T-AATGAAAGA-T、

待检测信号-TT-AGTGAATAA-T-AGTGAATAA-T、

待检测信号-TT-AAGTAATGA-T-AAGTAATGA-T、

待检测信号-TT-GAGTAAGAA-T-GAGTAAGAA-T、

待检测信号-UU-GUAAAUGAA-U-GUAAAUGAA-U；

所述n的范围为40≤n≤60；

序列从左到右为序列的5’端到3’端。