[发明专利]一种体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法

权利要求书

1.一种体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：包括，

获取孕鼠大脑皮质和海马组织；

用DMEM/F12基础培养液制备所述海马组织的单细胞悬液；

用神经干细胞培养液重悬，接种、培养形成细胞球；

消化所述细胞球，终止后过滤得单细胞悬液，接种后传代培养，收集细胞球；

消化收集到的所述细胞球，终止后用神经干细胞培养液重悬，接种，让悬浮的单细胞贴壁，继续用神经干细胞培养液培养。

2.如权利要求1所述的体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：所述神经干细胞培养液由DMEM/F12、2％B27、20ng/mlEGF、20ng/mlbFGF组成。

3.如权利要求1或2所述的体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：所述接种，其接种的细胞密度为1×10⁴个/ml～1×10⁵个/ml。

4.如权利要求3所述的体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：所述接种、培养形成细胞球，其接种的细胞密度为1×10⁵个/ml；所述接种后传代培养，其其接种的细胞密度为1×10⁴个/ml。

5.如权利要求1或2或4任一所述的体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：所述消化用的酶包括Accutase酶、胰酶中的一种或几种。

6.如权利要求5所述的体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：所述消化所述细胞球，其为使用Accutase酶进行；所述消化收集到的所述细胞球，其为使用胰酶进行。

7.如权利要求1或2或4任一所述的体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：所述终止，其为用含10％FBS的DMEM/F12培养基终止消化。

8.如权利要求1或2或4任一所述的体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：所述传代，其为传代3次以上。

9.如权利要求1或2或4任一所述的体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：所述培养，其为培养2～7天。

10.如权利要求9所述的体外纯化培养大鼠胚胎海马放射状胶质细胞的方法，其特征在于：所述培养形成细胞球，其为培养5～7d；所述接种后传代培养，其为培养5～7d；所述继续用神经干细胞培养液培养，其为培养3天以上。