[发明专利]一种烟草特有N-亚硝胺标准物质的制备方法

权利要求书

1.一种烟草特有N-亚硝胺标准物质的制备方法，所述烟草特有N-亚硝胺选自N-亚硝基降烟碱、4-(甲基亚硝基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮、N-亚硝基降新烟草碱和N-亚硝基假木贼碱中的至少一种；所述制备方法包括如下步骤：

1.候选物的检测

1-1.候选物结构验证

测定所述候选物的红外光谱、紫外光谱、质谱、核磁共振碳谱和核磁共振氢谱，根据图谱信息验证候选物的结构；如通过验证，则进行以下各步；

1-2.候选物杂质测定

测定所述候选物的水分含量W_水分、无机元素含量W_无机和残留溶剂含量W_溶剂；

1-3.候选物互为杂质情况测定

测定每种候选物中是否含有其它作为候选物的烟草特有N-亚硝胺；

1-4.候选物纯度的确定

测定每种候选物的纯度P_测定，代入下面的公式计算候选物的纯度P_纯度：

P_纯度＝(1-W_水分-W_元素-W_溶剂)×P_测定

如果P_纯度在所述候选物分析证书提供的纯度及精确度范围内，则以所述分析证书标的纯度为候选物的纯度；如果P_纯度不在所述候选物分析证书提供的纯度及精确度范围内，则以P_纯度为所述候选物的纯度；

2.溶剂验证

所述溶剂为色谱级甲醇，采用液相色谱-串联质谱对所述溶剂进行分析，测定其中是否含有所述候选物；如测定结果显示不含所述候选物，则验证通过；

3.烟草特有N-亚硝胺标准物质的配制和分装

取经过步骤1检测的所述候选物，以经过步骤2验证的甲醇为溶剂，在温度为20±2℃、相对湿度为60％±5％的环境下，以经过所述步骤1-4确定的候选物纯度，采用重量-容量法制备标准物质；然后将所述标准物质分装，立即封口，即得分装好的所述烟草特有N-亚硝胺标准物质，避光保存于0-4℃冰箱中；

4.烟草特有N-亚硝胺标准物质的检验

4-1.烟草特有N-亚硝胺标准物质均匀性检验

根据JJF 1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》均匀性评估中抽取单元数的要求，从步骤3得到的分装好的所述烟草特有N-亚硝胺标准物质中抽取规定数目的样品，用高效液相色谱法测定每个样品中烟草特有N-亚硝胺的含量，采用F检验法进行统计分析，如果F_计算小于F_0.05(组间自由度,组内自由度)，则表明测定样品之间在置信概率95％水平下不存在显著性差异，分装后的所述烟草特有N-亚硝胺标准物质是均匀的；

4-2.烟草特有N-亚硝胺标准物质稳定性检验

所述烟草特有N-亚硝胺标准物质稳定性检验包括60℃避光14天短期稳定性检验和0-4℃避光12个月长期稳定性检验；

5.烟草特有N-亚硝胺标准物质中各组分含量的定值

由单一实验室采用单一基准方法对所述烟草特有N-亚硝胺标准物质中各组分的含量进行定值；

6.烟草特有N-亚硝胺标准物质中各组分含量定值结果的不确定度评定

所述烟草特有N-亚硝胺标准物质中各组分含量定值结果的不确定度分量来自均匀性引入的不确定度、短期稳定性引入的不确定度、长期稳定性引入的不确定度和定值过程中引入的不确定度；对各组分的不确定分量分别进行评定并计算标准不确定度。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述烟草特有N-亚硝胺选自N-亚硝基降烟碱、4-(甲基亚硝基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮、N-亚硝基降新烟草碱和N-亚硝基假木贼碱中的全部。