[发明专利]一种间充质干细胞因子冻干用保护剂及其应用

权利要求书

1.一种间充质干细胞因子冻干用保护剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：改性谷朊粉1-5份、十四酸乙酯1-5份、磷酸氢钙0.5-1份、呋喃酮0.3-0.5份、茶多酚0.1-0.5份；

所述改性谷朊粉的制备过程如下：

(1)向纯化水中加入谷朊粉，调节pH至7-7.5后加入谷氨酰胺转氨酶，在45-50℃水解1-2h；

(2)取步骤(1)的水解液灭菌后加入发酵菌剂进行发酵，将发酵液离心后冻干即得改性谷朊粉。

2.根据权利要求1所述间充质干细胞因子冻干用保护剂，其特征在于，所述谷朊粉和谷氨酰胺转氨酶的质量比为1：0.15-0.35。

3.根据权利要求1所述间充质干细胞因子冻干用保护剂，其特征在于，所述发酵菌剂为植物乳杆菌，发酵条件为在37℃发酵40h。

4.根据权利要求1所述间充质干细胞因子冻干用保护剂，其特征在于，步骤(1)纯化水中谷朊粉的浓度为20-25wt％。

5.如权利要求1至4任一项所述间充质干细胞因子冻干用保护剂的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)脂肪间充质干细胞的获取：将分离得到的脂肪组织经酶解后重悬于培养基中进行原代培养，待细胞融合度达到80-90％时进行传代培养；

(2)收集细胞培养液：在传代培养细胞融合度为75-85％时更换为无血清的DMEM/F12培养基，饥饿培养18-24h，收集上清，过滤后得到细胞培养液；

(3)将步骤(2)的细胞培养液通过40KD的超滤膜，收集透析液，再将透析液通过2KD的超滤膜，收集截留液，在截留液中加入保护剂后冷冻干燥得到冻干粉。

6.根据权利要求5所述间充质干细胞因子冻干用保护剂的应用，其特征在于，每100mL截留液中添加保护剂10-15g。

7.根据权利要求5所述间充质干细胞因子冻干用保护剂的应用，其特征在于，所述步骤(1)中培养基包括基础培养基DMEM/F12、以培养基终浓度计的胰岛素25-30μg/mL、人血白蛋白40-50μg/mL、谷胱甘肽20-30μg/mL、维生素C 10-15μg/mL、2-巯基乙醇150-200μΜ、芦荟苷10-15ng/mL。

8.根据权利要求5所述间充质干细胞因子冻干用保护剂的应用，其特征在于，步骤(3)的冷冻干燥过程如下：在常压下-80℃预冷冻5-8h，将预冷冻后的样品放入冻干机中于压强20-40Pa，温度-40～20℃冷冻干燥20-25h。