[发明专利]一种间充质干细胞因子冻干用保护剂及其应用

说明书

本发明公开了一种间充质干细胞因子冻干用保护剂，包括以下重量份的原料：改性谷朊粉1‑5份、十四酸乙酯1‑5份、磷酸氢钙0.5‑1份、呋喃酮0.3‑0.5份、茶多酚0.1‑0.5份；所述改性谷朊粉的制备过程如下：(1)向纯化水中加入谷朊粉，调节pH至7‑7.5后加入谷氨酰胺转氨酶，在45‑50℃水解1‑2h；(2)取步骤(1)的水解液灭菌后加入发酵菌剂进行发酵，将发酵液离心后冻干即得改性谷朊粉。本发明提供的保护剂，通过改性谷朊粉、十四酸乙酯、磷酸氢钙、茶多酚和呋喃酮的协同作用，有效保护细胞因子的活性，提高细胞因子产品长期保存的稳定性。本发明还提供了上述保护剂的应用，将其用于脂肪间充质干细胞因子的冻干过程中，显著提高了冻干粉中细胞因子的活性以及长期保存的稳定性。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种间充质干细胞因子冻干用保护剂及其应用。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是一类来源于出生前胚胎发育阶段的中胚叶和外胚层，存在于多种组织器官，如骨髓、脂肪组织、肌肉组织、肺、肝脏、胰腺和滑膜等。MSCs具有多向分化能力和旁分泌作用，其在不同的诱导因子作用下可以向脂肪细胞、软骨细胞、城固细胞等分化；还能够分泌多种细胞因子，包括趋化因子、粘黏附分子等，近年来，研究表明干细胞分泌的各种生物活性因子，可以作为一种新型的无细胞生物调控模式促进或完成细胞间的信号传导，从而响应机体生理或病理状态的变化，以此对机体内环境的稳定发挥重要的调控作用。

脂肪间充质干细胞是指存在于脂肪组织中的MSCs，具有自我更新和多向分化的潜能，可以分化成骨细胞、软骨细胞脂肪细胞等。由于脂肪组织几乎遍布全身，具有极强的可塑性。目前，脂肪间充质干细胞复合活性因子是将间充质干细胞在特定培养基和诱导条件下培养，取上清液纯化浓缩得到。液体的细胞因子给运输和保存带来很大不便，也限制了细胞因子的应用，现有技术中公开了将细胞因子冻干后应用，得到冻干粉运输保存方便，但是，现有的冻干方法会造成细胞因子失活，冻干得到的细胞因子冻干粉活性差，长期保存不稳定，影响细胞因子产品的应用效果。

因此，要保证细胞因子冻干粉的活性并最大程度保留细胞因子的修复再生功能，可以在间充质干细胞因子冷冻干燥过程中添加保护剂，开发适合临床应用及规模性产业化的脂肪间充质干细胞复合因子产品。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种间充质干细胞因子冻干用保护剂，避免细胞因子在冻干过程中因温度、压力的变化失去活性，提高冻干产品中细胞因子的含量。

本发明的目的之二在于提供一种间充质干细胞因子冻干保护剂的应用。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种间充质干细胞因子冻干用保护剂，包括以下重量份的原料：改性谷朊粉1-5份、十四酸乙酯1-5份、磷酸氢钙0.5-1份、呋喃酮0.3-0.5份、茶多酚0.1-0.5份；

所述改性谷朊粉的制备过程如下：

(1)向纯化水中加入谷朊粉，调节pH至7-7.5后加入谷氨酰胺转氨酶，在45-50℃水解1-2h；

(2)取步骤(1)的水解液灭菌后加入发酵菌剂进行发酵，将发酵液离心后冻干即得改性谷朊粉。

进一步地，所述谷朊粉和谷氨酰胺转氨酶的质量比为1：0.15-0.35。

进一步地，所述发酵菌剂为植物乳杆菌，发酵条件为在37℃发酵40h。

进一步地，步骤(1)纯化水中谷朊粉的浓度为20-25wt％。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

上述间充质干细胞因子冻干用保护剂的应用，包括以下步骤：