[发明专利]Abcg4基因在构建肥胖程度呈双向变化动物模型中的用途

权利要求书

1.Abcg4基因在构建肥胖程度及血液甘油三酯含量呈双向变化小鼠模型中的用途，其特征在于，所述用途具体是指通过敲除C57BL/6J小鼠体内Abcg4基因来构建小鼠模型，表现为以同窝生同性别野生型为参照，雌性变胖且血液甘油三酯含量降低，雄性变瘦且血液甘油三酯含量升高；

敲除小鼠Abcg4基因的方法包括如下步骤：

S1、以野生型小鼠基因组为模板，以引物对I扩增包含Abcg4基因第6外显子至部分第7外显子的片段，记作片段I；

所述引物对I的核苷酸序列为：

FI:5′-TGGTGGATGGTGCAGATGAC-3′；

RI:5′-AAATCGGGGTGGTGCTTAGG-3′；

以引物对II扩增包含Abcg4基因第9-14外显子的片段，记作片段II；

所述引物对II的核苷酸序列为：

FII:5′-AACTGACGAAGAAGCCGGAG-3′；

RII：5′-ATCAAAGAAGGACTGCCCCG-3′；

S2、将片段I插入到pCRII载体的eGFP编码区前，获得融合片段I，将融合片段I插入到靶向载体OSDUPDEL的多克隆位点A，将片段II插入到同一个靶向载体OSDUPDEL的多克隆位点B，获得靶向重组载体；

S3，上述重组载体经注射胚胎干细胞进行同源重组后，获得ES细胞打靶产物，对ES细胞打靶产物进行阳性克隆鉴定，筛选出正向敲除的ES细胞；

S4，将S3筛选出的ES细胞注射到C57BL/6J小鼠囊胚中并植入假孕母鼠体内获得具有种系传递能力的杂合子代小鼠；

S5，将上述杂合子代小鼠与C57BL/6J小鼠进行N代的回交，产生Abcg4基因重要功能部位缺陷鼠种系，杂合子相互交配，生成Abcg4基因缺陷型小鼠。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，S5中，N≥16。