[发明专利]一种阿托西班的固相合成方法

说明书

本发明属于多肽固相合成领域，公开了一种阿托西班的固相合成方法，该方法包括以下步骤：以Sieber Resin作为起始树脂，合成Fmoc‑Gly‑Sieber Resin；按照固相合成的方法，依次偶联相应的保护氨基酸或片段，制得阿托西班线性肽树脂，其中第8位氨基酸采用Fmoc‑Orn(Dde)‑OH；采用水合肼脱除Fmoc‑Orn(Dde)‑OH的Dde保护，再直接固相氧化，裂解后得到阿托西班。本发明解决了阿托西班树脂裂解后易生成双tBu杂质和二聚体杂质的问题；避免了使用高浓度酸分离肽与树脂时，肽的稳定性受影响的问题，是一种操作简便、质量易于控制、环境污染小和适合规模化生产的阿托西班的方法。

技术领域

本发明涉及多肽固相合成领域，尤其涉及一种阿托西班的固相合成方法。

背景技术

阿托西班注射液(Atosiban Acetate Injection)由辉凌公司(Ferring AB)研制，2000年 3月23日首次在奥地利上市，商品名为：阿托西班(Atosiban)可以抑制催产素和催产素受体结合，从而直接抑制催产素作用于子宫，抑制子宫收缩；也可以抑制磷脂酰肌醇的水解作用，阻断第二信使的生成以及Ca⁺的活动，从而间接抑制子宫对催产素的反应，使子宫收缩得到抑制。

阿托西班是一个九肽，肽链中含有3个非天然氨基酸D-Tyr(Et)、Mpa和Orn及一对在Mpa和Cys之间成环的二硫键，分子结构式为：Cyclo[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys]-Pro-Orn-Gly-NH₂

公告号为CN101357937B的中国专利，采用固相逐步偶联得到Mpa(SX)-D-Tyr(OEt)-Ile- Thr(tBu)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-Rink Amide Am Resin，肽树脂经裂解后氧化得到阿托西班粗品。本法由于使用了tBu保护基以及含有tBu源的Boc保护基，肽树脂在裂解时会产生tBu阳离子，未能被捕获剂及时捕获的tBu阳离子在裂解的同时可以重新与肽上面的活性基团反应，生成带保护基的肽。-SH和-OH性质相似，都可以与tBu阳离子结合，裂解时SH比OH更容易捕获tBu阳离子，tBu阳离子与肽上面的两个-SH结合之后，便不能被氧化而成为杂质。故而裂解后得到的线性肽易生成巯基进攻tBu的杂质，氧化时难以转化为产物，降低了产品质量和收率；且此法使用氨水氧化，氧化产生废液体积多，环保压力大。公告号为CN101696236B的中国专利采用固相逐步偶联得到Mpa(Trt)-D-Tyr(Et)-Ile-Thr(tBu)- Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Orn(Boc)-Gly-Rink Amide Am Resin，直接固相氧化生成二硫键，再裂解得到阿托西班。此方法裂解需要在较强的酸性环境中才能将肽与树脂分离，反应条件不温和，不利于肽的稳定；高浓度酸的条件下，肽-树脂连接处的树脂上容易脱落基团生成杂质，固相氧化后的肽树脂在裂解时容易生成二聚体。现有技术中的裂解试剂均包括含硫捕获剂 EDT或硫代苯甲醚，这些捕获剂气味强烈刺鼻，放大生产，车间气味难以控制，给工业化大生产环保构成压力。

因此，急需发明一种能减少双tBu杂质和二聚体杂质产生，裂解条件温和，可以提高产品质量和收率的阿托西班的合成方法。

发明内容

本发明针对现有技术裂解后的粗肽杂质数量多，粗品纯度低，收率低，成本高的问题，提供了一种阿托西班的固相合成方法，该方法用Fmoc-Orn(Dde)-OH取代Fmoc-Orn(Boc)- OH，使肽序中减少一个tBu源的位点而减少tBu类杂质的生成，从而提高产品纯度和收率。同时，由于Trt保护基对酸更敏感且更易脱落，故本发明采用酸敏感的Sieber Resin作为起始树脂，使得裂解试剂简单，裂解试剂中的溶剂DCM沸点低，容易去除，后续处理方便，降低了异丙醚使用量，节省成本。

本发明提供了一种阿托西班的固相合成方法，主要包括如下步骤：

1)使用酸敏感的氨基树脂与Fmoc-Gly-OH偶联得到Fmoc-Gly-树脂；