[发明专利]一种精准调控α-葡聚糖酶解反应并定向萃取特定分子量产物的方法及其应用

权利要求书

1.一种精准调控α-葡聚糖酶解反应并定向萃取特定分子量产物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)标准曲线的制备

a)分别配置质量分数为0％～25％的α-葡聚糖标准溶液和质量分数为50％～60％的聚乙二醇溶液，将上述α-葡聚糖标准溶液逐滴加入聚乙二醇溶液中至混合液出现浑浊，记录混合液中质量分数为0％～25％的α-葡聚糖溶液变浑浊时对应的聚乙二醇溶液的质量分数，以混合液中α-葡聚糖标准溶液的质量分数为横坐标，聚乙二醇溶液的质量分数为纵坐标制作α-葡聚糖-聚乙二醇标准曲线；

b)分别配置质量分数为0％～25％的盐溶液和质量分数为50％～60％的聚乙二醇溶液，将上述盐溶液逐滴加入聚乙二醇溶液中至混合液出现浑浊，记录混合液中质量分数为2％～14％的盐溶液变浑浊时对应的聚乙二醇溶液的质量分数，以混合液中盐溶液的质量分数为横坐标，聚乙二醇溶液的质量分数为纵坐标制作盐-聚乙二醇标准曲线；

c)根据步骤a)的α-葡聚糖-聚乙二醇标准曲线和步骤b)的盐-聚乙二醇标准曲线结合发酵液中α-葡聚糖的质量分数确定实际萃取过程中聚乙二醇溶液和盐溶液的用量；

(2)按步骤(1)中制作的标准曲线指示，取聚乙二醇(PEG8000)和待测α-葡聚糖的混合液，震荡混合，静置分层，从上到下分成两层，上相为聚乙二醇相、下相为α-葡聚糖相，将α-葡聚糖酶溶液加入到下相两相界面接近处，轻微震荡后，保温，观察到两相开始混合后，向混合液中注入盐溶液至其最终质量分数为2％～14％，静置待重新分层，离心，此时液体分成两相，取下相，加入酒精，离心，取沉淀即为目标低分子量α-葡聚糖；上相加入硫酸镁溶液，震荡后静置分层，上相为聚乙二醇相，下相为盐溶液相，取下相，超滤脱盐浓缩后，获得α-葡聚糖酶回收液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的聚乙二醇PEG8000和α-葡聚糖的混合液中聚乙二醇PEG8000和α-葡聚糖按质量比4～4.8:6.2～10计算。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的聚乙二醇PEG8000和α-葡聚糖的混合液的溶剂为水。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的α-葡聚糖酶的加入量按总反应体系每增加1％的α-葡聚糖，α-葡聚糖酶的最终加入量则增加0.002～0.005U/mL。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的α-葡聚糖酶来源于菌和商业购买中的至少一种；所述的α-葡聚糖酶来源于菌时，所述的α-葡聚糖酶来源于保藏编号为CCTCCNo：M2013096的毕赤酵母工程菌。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的α-葡聚糖酶的酶活为0.02～0.5U/mL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的保温的温度为40～60℃；

所述的盐溶液为硫酸铵溶液和磷酸氢二钾溶液中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的离心的条件为：4000～6000rpm离心4～6min；

所述的酒精为80％～95％v/v的酒精；

所述的向下相加入酒精后酒精的终浓度为75％～95％v/v；

所述的加入酒精后离心的条件为：1000～5000rpm离心4～6min。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述的硫酸镁溶液中硫酸镁的质量分数为25％～36％w/w；

所述的向上相加入硫酸镁溶液后硫酸镁的加入量为体系的10％～14％w/w；

所述的超滤脱盐通过聚醚砜树脂膜进行。

10.权利要求1-9任一所述的精准调控α-葡聚糖酶解反应并定向萃取特定分子量产物的方法在食品和/或药品中的应用。