[发明专利]一种抗鸡新城疫转移因子的制备方法

权利要求书

1.一种体外制备抗鸡新城疫特异性转移因子的制备方法，其特征在于，按照以下步骤进行：

（1）无菌环境下采取鸡脾脏或鸡血，用鸡脾脏或外周血制备淋巴细胞单层，无菌静脉采取动物全血15-20ml，加0.8%肝素溶液0.2m1抗凝，静置20-40min，用带胶球吸管吸取红细胞层以上的所有血浆，特别是紧接红细胞层上的白细胞层要尽量吸取，分装于消毒离心管内，用PBS (pH为7.2)液反复洗涤2-3次，离心速度600-1000转/分，然后用含30%犊牛血清水解乳蛋白40ml进行白细胞培养，混合均匀后分装于容量100ml细胞培养瓶中，塞紧瓶塞，置37℃细胞培养箱中，经2-3天，白细胞均匀贴壁，即制成淋巴细胞单层；

（2）对所制备的淋巴细胞单层进行传代培养，显微镜下观察（1）中所制备的淋巴细胞单层，确认其生长状态良好即可进行细胞的传代培养；

（3）抗鸡新城疫特异性转移因子的制备，当传代的淋巴细胞长成单层后，用植物血凝素（终浓度为50-100mg/L）和鸡新城疫（终浓度为1000-1500血凝单位/ml）诱导培养，离心培养2-3天后，8000转/分、20-30min离心细胞培养液，取上清液，将其置于4℃下磁力搅拌透析12-24h，超滤除菌，即获得体外制备抗鸡新城疫特异性转移因子。

2.根据如权利要求1所述方法体外制备抗鸡新城疫的特异性转移因子，其特征在是：刺激鸡脾细胞和鸡血淋巴细胞增殖的植物血凝素剂的质量浓度为50-100mg/L。

3.根据如权利要求1所述方法体外制备抗鸡新城疫的特异性转移因子，其特征在是：制备淋巴细胞单层以及细胞培养均在无菌状态下进行。

4.根据如权利要求1所述方法体外制备抗鸡新城疫的特异性转移因子，其特征在是：离心时均需在4℃进行。

5.根据如权利要求1所述方法体外制备抗鸡新城疫的特异性转移因子，其特征在是：超滤除菌所需滤膜为0.22μm滤膜。

6.如权利要求1-5所述的一种体外制备抗鸡新城疫特异性转移因子的制备方法。