[发明专利]一种捕获单克隆抗体-肿瘤坏死因子融合蛋白的亲和纯化方法有效

申请号：	202011611594.1	申请日：	2020-12-30
公开（公告）号：	CN112574321B	公开（公告）日：	2023-10-20
发明（设计）人：	方国波;蔡则玲;吴珩	申请（专利权）人：	上海赛金生物医药有限公司
主分类号：	C07K19/00	分类号：	C07K19/00;C07K1/22;A61L2/18
代理公司：	上海一平知识产权代理有限公司 31266	代理人：	王正君;徐迅
地址：	201203 上海市浦东新区***	国省代码：	上海;31
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摘要：
搜索关键词：	一种捕获单克隆抗体肿瘤坏死因子融合蛋白亲和纯化方法
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【权利要求书】：

1.一种对抗体-肿瘤坏死因子融合蛋白进行纯化的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)提供一待纯化的原料，其中所述原料含有抗体-肿瘤坏死因子融合蛋白；

(b)将所述待纯化的原料进行亲和层析，收集含有样品峰的洗脱液，所述亲和层析的填料选自下组：Mabselecct SuRe、Prism A、Mabcapture A、Amsphere A3、Eshmuno A、KancapA3G、Unimab 50、或其组合，所述洗脱液为含有抗体-肿瘤坏死因子融合蛋白的中间产品。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体-肿瘤坏死因子融合蛋白包括抗Her-2人源化单克隆抗体-肿瘤坏死因子a融合蛋白。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述填料选自下组：KancapA 3G、Unimab 50、或其组合。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)中还包括：

(b1)用淋洗缓冲液对层析柱进行淋洗；和/或

(b2)用平衡缓冲液对层析柱进行平衡；和

(b3)用洗脱缓冲液洗脱，并收集含有样品峰的洗脱液，所述洗脱液为含有抗体-肿瘤坏死因子融合蛋白的中间产品。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(b1)中，所述淋洗缓冲液选自下组：醋酸-醋酸钠缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、枸橼酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、或其组合。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(b2)中，所述平衡缓冲液选自下组：磷酸盐缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、或其组合。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(b3)中，所述洗脱缓冲液选自下组：醋酸-醋酸钠缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、枸橼酸缓冲液、精氨酸-盐酸缓冲液、或其组合。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液的浓度为10－300mmol/L，较佳地，10－200mmol/L，更佳地，20－100mmol/L。

9.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(b3)中，所述洗脱液的pH为3.2－5，较佳地，3.8-4。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱液中，所述聚集体含量≤10％，较佳地，≤5％，更佳地，≤2％。