[发明专利]一种RNA标记物及包含该标记物的活细胞标记方法和应用

权利要求书

1.一种同时检测活细胞中多个RNA的方法，其特征在于，包括：标记待测基因、表达RNA结合蛋白和荧光检测；

所述标记待测基因包括：

使用多种RNA标记物于基因终止密码子后3’UTR的位置，一对一地标记待检测基因，每种RNA标记物均包含24~48个茎环结构，每个茎环结构独立地选自两种不同的茎环结构；并且同时包括两种不同的茎环结构的RNA标记物中，每种茎环结构至少有12个；

任意两种不同的RNA标记物之间，两种不同的茎环结构中的任一种占自身茎环结构总数比例的差值在15~50%之间；

所述荧光检测为在所述表达RNA结合蛋白之后对所述细胞进行荧光成像得到不同类型的荧光蛋白的荧光强度，通过不同类型的荧光蛋白的相对荧光强度和绝对荧光强度实现对多个RNA的检测；

所述通过不同类型的荧光蛋白的相对荧光强度和绝对荧光强度实现对多个RNA的检测为：

根据荧光成像结果中，每个荧光点中不同荧光的相对强度确定该荧光点对应的RNA种类，根据绝对荧光强度确定不同种类RNA的表达差异。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述两种不同的茎环结构为MS2、PP7、λboxB和U1A中的任意两种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述两种不同的茎环结构为MS2和PP7。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述表达RNA结合蛋白为：在所述活细胞中同时表达所述两种不同的茎环结构分别对应的RNA结合蛋白，这两种RNA结合蛋白分别连接不同类型的荧光蛋白。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，当所述两种不同的茎环结构为MS2和PP7时，MS2对应的RNA结合蛋白为MCP蛋白，连接有CFP荧光蛋白；PP7对应的RNA结合蛋白为PCP蛋白，连接有mCherry荧光蛋白。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述通过不同类型的荧光蛋白的相对荧光强度和绝对荧光强度实现对多个RNA的检测为：

根据荧光成像结果中，每个荧光点中不同荧光的相对强度确定该荧光点对应的RNA种类，根据绝对荧光强度确定不同种类RNA的表达差异。

7.权利要求1-6任一项所述方法在活细胞成像中的应用。