[发明专利]一种提高人体细胞衍生的细胞膜外囊泡中特定miRNA含量的方法

说明书

本发明提供了一种提高人体细胞衍生的细胞膜外囊泡中特定miRNA含量的方法。具体地，本发明方法包括：在免疫调节因子存在下，对干细胞进行诱导培养，从而获得一发酵培养液；和从所述发酵培养液中分离出所述的细胞膜外囊泡。在本发明方法制备的细胞膜外囊泡中，抑炎miRNA(如miR‑21‑5p、miR146a‑5p)的含量或表达量显著增加，并且白介素1β(IL1β)、白介素6(IL6)和、金属蛋白酶8(MMP8)等促炎因子的含量显著降低，因而本发明细胞膜外囊泡具有更好的抑炎活性。本发明还提供了含所述细胞膜外囊泡的药物组合物和应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高人体细胞衍生的细胞膜外囊泡中特定miRNA含量的方法。

背景技术

细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是指细胞分泌的具有磷脂双分子层囊泡结构的物质，按照大小及产生机制，又可分为外泌体(exosome)与微囊泡(microvesicle)。其中，外泌体是细胞主动分泌的，是细胞间信号传导的重要途径，由细胞通过溶酶体途径，由多囊体(multi-vesicle body)与细胞质膜融合后分泌到细胞外。

细胞外囊泡主要特征包括：1)大小在30-150nm，2)具有磷脂双分子层，在透射电镜下显示为杯状囊结构，3)具有CD63、CD9、CD81等四跨膜蛋白，以及TSG101，Alix等标志物。外泌体货物种类繁多，包括蛋白质、小RNA(包括microRNA、lncRNA、circRNA等)及少量DNA。

MicroRNA在增殖、凋亡等细胞活动中发挥着重要作用。有研究表明它们与肺部炎症进展有紧密联系，在治疗肺纤维化疾病中，具有很好的潜力。间充质干细胞来源的外泌体中含有丰富的microRNA，可能通过调控炎症通路起到抑炎作用。提高人间充质干细胞衍生的细胞膜外囊泡中的某些microRNA的含量，在炎症性疾病及纤维化疾病中，具有重要意义。然而，现有技术中，还没有特别高效的提高细胞膜外囊泡中某些特定microRNA的方法。

综上所述，本发明需要开发一种高效提高人体细胞衍生的细胞膜外囊泡中特定miRNA含量的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高人体细胞衍生的细胞膜外囊泡中特定miRNA含量的方法。

在本发明的第一方面，提供了一种提高细胞膜外囊泡中miRNA含量的方法，包括步骤：

(a)提供一干细胞；

(b)在合适的培养条件下，对所述干细胞进行预培养，从而获得融合度P为60-95％的经预培养的干细胞；

(c)在免疫调节因子存在下，对所述经培养的干细胞进行诱导培养，从而获得一发酵培养液，所述发酵培养液含经诱导培养的干细胞以及由经诱导培养的干细胞所产生的细胞膜外囊泡；其中，其中所述免疫调节因子包括干扰素；

(d)从上一步骤获得的所述发酵培养液中分离出所述的细胞膜外囊泡。

在另一优选例中，所述的分离出所述的细胞膜外囊泡中，选自下组的一种或多种miRNA含量增加：miR-146a、miR-21、let-7a或其组合。

在另一优选例中，所述的分离的细胞膜外囊泡具有选自下组的一个或多个特征：

(m1)相对表达量M1上升的miR-21(如miR-21-5p)，较佳地M1≥3，更佳地为3-6；

(m2)相对表达量M2上升的miR-146a(如miR-146a-5p)，较佳地M2≥3，更佳地为3-9；

(m3)相对表达量M3上升的let-7a(如let-7a-5p)，较佳地M3≥3，更佳地为3-6；