[发明专利]摇动培养促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法

权利要求书

1.一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的方法，其特征在于，包括：

将脐带血单个核细胞接种于初始培养基中在35～39℃及3～7体积％CO₂下进行培养12～14天，所述脐带血单个核细胞的接种量为1×10⁵个/cm²～10×10⁵个/cm²，以便获得巨核系细胞，

其中，所述初始培养基包括：

基础培养基,所述基础培养基选自stemspan无血清培养基；

血小板生成素，所述血小板生成素的浓度为50ng/mL；

重组人干细胞因子，所述重组人干细胞因子的浓度为50ng/mL；

白介素-3，所述白介素-3的浓度为20ng/mL；

白介素-6，所述白介素-6的浓度为50ng/mL；

泊洛沙姆188，所述泊洛沙姆188的浓度为1mg/mL；以及

芳香烃受体拮抗剂，所述芳香烃受体拮抗剂为SR1，所述芳香烃受体拮抗剂的浓度为1μM，

所述培养是在G-Rex培养装置中摇床进行，所述摇床的转速为70～120rpm，

于培养第7d、12d、17d时半量换液，弃去一半培养基，再补加新鲜培养基，

所述新鲜培养基与所述初始培养基的组分相同，所述新鲜培养基中泊洛沙姆188和芳香烃受体拮抗剂的浓度与初始培养基中对应的浓度相同，其余各组分为初始培养基中对应的各组分浓度的0.5～4倍。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脐带血单个核细胞是通过下列方式获得的：

将脐带血与羟乙基淀粉混合，静置，收集上清液，将所述上清液离心，收集细胞沉淀；

所述细胞沉淀重悬于生理盐水中，添加淋巴细胞分离液，离心，收集细胞沉淀，获得脐血单个核细胞。