[发明专利]摇动培养促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法

说明书

本发明提出了促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法。所述培养基包括：基础培养基；血小板生成素；重组人干细胞因子；白介素‑3；白介素‑6；泊洛沙姆188；以及芳香烃受体拮抗剂。本发明的培养基可以有效促进造血干细胞向巨核系细胞诱导分化，提高分化效率、巨核系细胞的得率和活性，具有广泛地应用前景。

技术领域

本发明涉及生物工程领域。具体地，本发明涉及摇动培养促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法。

背景技术

血小板是血液中的有形成分，具有黏附、聚集和释放的功能，参与止血、维持血管壁完整、凝血和炎症反应，在疾病发展过程中扮演重要角色。多种原因可导致血小板减少，如肿瘤、再生障碍性贫血、血小板减少性紫瘫等，而血小板输注常作为辅助支持治疗的手段。造血干/祖细胞具有自我更新和多向分化潜能，体外模拟或部分模拟体内的造血过程能够使其定向诱导分化为巨核系细胞，可作为治疗血小板性疾病的新途径，以满足临床上对血小板的迫切需求。

由于脐带血中含有大量不成熟、免疫功低、增殖能力强的造血干细胞，采集对供者无害、无伦理、易于获得等可作为造血干细胞重要组织来源。

然而，目前的促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的体系还存在增殖慢、诱导分化效率低等问题。因此，仍需要研究。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出了一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法，利用该培养基可以有效促进造血干细胞向巨核系细胞诱导分化，提高分化效率、巨核系细胞的得率和活性，具有广泛的应用前景。

为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基。根据本发明的实施例，所述培养基包括：基础培养基；血小板生成素；重组人干细胞因子；白介素-3；白介素-6；泊洛沙姆188；以及芳香烃受体拮抗剂。

根据本发明实施例的培养基中，芳香烃受体拮抗剂(SR1)和泊洛沙姆188(P188)联用可以促进造血干细胞增值和巨核系细胞的诱导分化，由此，在含有血小板生成素(TPO)、重组人干细胞因子(SCF)、白介素-3(IL-3)、白介素-6(IL-6)的基础培养基中复配P188和SR1，可以有效促进造血干细胞的扩增并诱导分化为巨核系细胞，提高分化效率、巨核系细胞的得率和活性。

根据本发明的实施例，上述促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述血小板生成素的浓度为10～200ng/mL，优选30～70ng/mL；所述重组人干细胞因子的浓度为10～200ng/mL，优选30～70ng/mL；所述白介素-3的浓度为5～60ng/mL，优选10～30ng/mL；所述白介素-6的浓度为10～150ng/mL，优选30～70ng/mL；所述泊洛沙姆188的浓度为0.02～3mg/mL，优选0.5～1.5mg/mL；所述芳香烃受体拮抗剂的浓度为0.2～10μM，优选0.5～1.5μM。

根据本发明的实施例，所述基础培养基选自stemspan无血清培养基。

在本发明的另一方面，本发明提出了一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将单个核细胞接种于初始培养基中进行培养，以便获得巨核系细胞；所述初始培养基选自前面所述培养基。利用根据本发明实施例的方法培养所述单个核细胞，能够有效促进造血干细胞向巨核系细胞诱导分化，操作简单、成本低、诱导分化效率高。

根据本发明的实施例，所述培养是在35～39℃及3～7体积％CO₂下进行10～17天，优选12～14天。