[发明专利]一种双重可视化单核苷酸多态性检测方法及其应用

权利要求书

1.引物组，其特征在于，所述引物组靶向鸡白痢沙门菌rfbS基因第237位点，所述引物组的序列为：

引物7a：5’-GGAAGAGGAACAATGAAGCTACCA-3’(SEQ ID NO.1)；

引物6a：5’-CACGACAGAAAATAATTGGATCG-3’(SEQ ID NO.2)；

引物5a：5’-ACTATTGCTTGCTATGGAAGAC-3’(SEQ ID NO.3)；

引物3a：5’-TAACGAACCTGCAACAGCTTTAAT-3’(SEQ ID NO.4)；

引物4s：5’-GGCAGTGATGTTCCACAAT-3’(SEQ ID NO.5)；

启动引物1s-5a：5’-ACTATTGCTTGCTATGGAAGACAATACTGCATCAAGTGATGAGATAGACTCTAC(SEQ ID NO.8)-C3spacer-3’；

其中，所述启动引物1s-5a自5’端第49位碱基C为RNA碱基。

2.探针，其特征在于，所述探针靶向鸡白痢沙门菌rfbS基因第237位点，所述探针含有荧光基团和猝灭基团，所述荧光基团优选为FAM，所述猝灭基团优选为Eclipse。

3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，所述探针的序列为：

探针2a：5’-TCTTATGCCTATCAGAGTATT(SEQ ID NO.6)[FAM]AGAGTCTAT(SEQ ID NO.7)-3’；

其中，所述探针2a自5’端第25位碱基G为RNA碱基。

4.一种SNP检测方法，其特征在于，所述SNP检测方法包括：

在启动引物和验证探针上均设置RNA碱基和RNA修饰酶，扩增待测引物，根据扩增结果判断待测样品是否含有SNP；

其中，所述SNP检测方法通过可视化效果判断待测样品是否含有SNP；

所述可视化效果优选包括颜色反应和荧光反应。

5.根据要求4所述的SNP检测方法，其特征在于，所述SNP检测方法包括以下步骤：

用权利要求1所述引物扩增待测样品，观察颜色反应和荧光反应；

若产生颜色反应和荧光反应，则所述待测样品中含有SNP；

若不产生颜色反应和/或荧光反应，则所述待测样品中不含有SNP。

6.根据权利要求5所述的SNP检测方法，其特征在于，所述SNP检测方法的扩增体系为：

其中，所述Mix预混液含有(NH₄)₂SO₄、KCl、Tween-20、甲酚红溶液、KOH、dNTP、甜菜碱、MgSO₄、Bst DNA聚合酶和Rnase H₂酶中的一种或多种。

7.根据权利要求5所述的SNP检测方法，其特征在于，所述SNP检测方法的反应程序为：恒温60-65℃反应55-60min。

8.根据权利要求5所述的SNP检测方法，其特征在于，所述SNP检测方法的检测对象包括鸡白痢沙门菌。

9.权利要求1所述引物组或权利要求2～3任一项所述探针在检测鸡白痢沙门菌中的应用。

10.权利要求4～8任一项所述的SNP检测方法在鸡白痢沙门菌SNP位点筛查中的应用。