[发明专利]一种能提高枯草芽孢杆菌纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备与应用

权利要求书

1.一种具有提高枯草芽孢杆菌纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，包括以下步骤，

S1，将大豆蛋白粉经筛后得到大豆蛋白微粉，加入蒸馏水配制一定浓度的大豆蛋白悬浊液A；

S2，将悬浊液A置于90～100℃水中一定时间，并在冷却后加入亚硫酸钠以破坏蛋白的空间结构；

S3，调节大豆蛋白悬浊液的pH后，加入碱性蛋白酶对其进行酶解；

S4，酶解一定时间后得到酶解液B，将酶解液B送入沸水中灭酶；

S5，将S4灭酶后再加入复合蛋白酶、木瓜蛋白酶再次酶解，得到酶解液B2

S6，将S5所得酶解液B2放入离心机中离心分离，得到上清液C；

S7，对上清液C进行超滤分离收集所需组分后冷冻干燥后得到大豆肽粉D；

S8，将大豆肽粉D加入去离子水溶解后进行大孔吸附树脂分离纯化，冷冻干燥后得到大豆肽粉E；

S9，将大豆肽粉E加入去离子水溶解，加入活性碳吸附，然后抽滤，收集沉淀，用去离子水冲洗至中性，加入55-75％乙醇溶液，在室温下震荡解析，抽滤收集上清液，冷冻干燥后得到大豆肽。

2.根据权利要求1中所述的一种具有提高枯草芽孢杆菌中纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述S1中，将大豆蛋白粉经过40-80目过筛后，加入去离子水配制成浓度为5-10％的大豆蛋白悬浊液A。

3.根据权利要求1中所述的一种具有提高枯草芽孢杆菌中纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述S2中，将悬浊液A置于90～100℃水中5-15min后，加入0.1-2％的浓度为0.1-1％的亚硫酸钠溶液。

4.根据权利要求1中所述的一种具有提高枯草芽孢杆菌中纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述S3中，用1mol/L氢氧化钠调节大豆蛋白悬浊液的pH至8-10.5，并在40-60℃水浴过中预热。

5.根据权利要求1中所述的一种具有提高枯草芽孢杆菌中纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述S3中，向大豆蛋白悬浊液A中添加碱性蛋白酶，加酶量为1-5％，酶解温度为40-65℃，酶解至溶液pH为7时，加热灭酶。

6.根据权利要求1中所述的一种具有提高枯草芽孢杆菌中纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述S5中，加入复合蛋白酶、木瓜蛋白酶，两种酶的添加总量为1-8％，两种酶的比例为(1-3)：1，保温40-60℃下不断搅拌，酶解3-5h，得到酶解液B2。

7.根据权利要求1中所述的一种具有提高枯草芽孢杆菌中纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述S6中，离心机转速为6000-8000r/min，离心时间10-20min。

8.据权利要求1中所述的一种具有提高枯草芽孢杆菌中纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述S7中对上清液C进行超滤分离，收集1KDa组分，其分离参数为：上样量5L，温度4-8℃，压力0.5MPa。

9.据权利要求1中所述的一种具有提高枯草芽孢杆菌中纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S8中，采用DA201-C大孔吸附树脂对大豆肽进行脱盐纯化，使用55-75％的乙醇进行洗脱，流速为1-3mL/min。

10.据权利要求1中所述的一种具有提高枯草芽孢杆菌中纳豆激酶产量的大豆蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S9中，底物大豆肽与活性炭的比为(1-3)：1，体系pH值为3.0-5.0，室温下震荡吸附1-3h，解析时间为1-3h。