[发明专利]一种提高文库转化率的二代测序建库试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种提高文库转化率的二代测序建库试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(1)酶混液，包括第一酶混液、第二酶液和第三酶混液；

所述第一酶混液由T4多聚核苷酸激酶、T4 DNA聚合酶、Klenow片段和Taq酶按照3:1:2:1的比例混合而成；

所述第二酶液为T4 DNA连接酶；

所述第三酶混液为2X QuarTaq HiFi HotStart混合液；

(2)缓冲液，所述缓冲液包括第一酶混液所对应的第一缓冲液和所述第二酶液所对应的第二缓冲液，

所述第一缓冲液由浓度为0.1-0.6M的Tris-HCl发卡型接头、浓度为0.05-0.1M的MgCl2、浓度为0.01-0.05M的DTT、浓度为0.1-1mM的dNTP和浓度为1-10mM的dATP混合而成；

所述第二缓冲液由浓度为0.1-0.6M的Tris-HCl、浓度为0.05-0.1M的MgCl2、浓度为0.01-0.05M的DTT、浓度为1-10mM的ATP、浓度为30％-50％的PEG6000和浓度为10-20％的1,2丙二醇混合而成；

(3)接头、index序列和通用引物。

2.根据权利要求1所述的提高文库转化率的二代测序建库试剂盒，其特征在于，所述第一酶混液中T4多聚核苷酸激酶的工作浓度为0.05～0.2U/μL，所述T4 DNA聚合酶的工作浓度为0.01～0.1U/μL，所述Klenow片段的工作浓度为0.01～0.05U/μL，所述Taq酶的工作浓度为0.01-0.05U/μL。

3.根据权利要求1所述的提高文库转化率的二代测序建库试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液中Tris-HCl的工作浓度为40～100mM，所述MgCl2的工作浓度为5～20mM，所述DTT的工作浓度为1～10mM，所述dNTP混合液的工作浓度为0.04～0.12mM，所述dATP的工作浓度为0.2-1.0mM。

4.根据权利要求1所述的提高文库转化率的二代测序建库试剂盒，其特征在于，所述第二缓冲液中，所述Tris-HCl的工作浓度为10～40mM，所述MgCl2的工作浓度为1～5mM，所述DTT的工作浓度为1～3mM，所述ATP的工作浓度为0.5～1.5mM，所述PEG6000的工作浓度为5％-10％w/v，所述1,2丙二醇的工作浓度为1％-4％v/v。

5.根据权利要求1所述的提高文库转化率的二代测序建库试剂盒，其特征在于，所述T4DNA连接酶的工作浓度为10～50U/μL；所述2X QuarTaq HiFi HotStart混合液的工作浓度为1X。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的提高文库转化率的二代测序建库试剂盒，其特征在于，所述接头为发卡型接头，由接头序列自身退火形成具有一个粘末端的茎环结构。

7.根据权利要求1所述的提高文库转化率的二代测序建库试剂盒，其特征在于，所述接头序列为序列表的序列1所示；所述的index序列如序列表的序列2所示；所述通用引物序列为序列表的序列3所示。

8.一种提高文库转化率的的方法，其特征在于，包括如下步骤：

对样本的基因组DNA进行片段化，得到DNA片段；

利用第一酶混液和第一缓冲液对DNA片段进行末端修复及加A，得到修复片段；

在DNA片段进行末端修复及加A过程中，利用同样具有dATP偏爱性DNA末端非模板依赖性加A活性的Taq酶完成DNA末端的加A；

在接头连接中添加具有连接增强作用的小分子物质；

在末端修复及加A步骤中，将DNA片段与上述的末端修复与加A缓冲液和末端修复与加A酶混合后，于20℃-37℃孵育15-30分钟，37℃-65℃孵育15-30分钟；

利用第二酶液、第二缓冲液以及接头对所述修复片段进行接头连接，得到带接头片段；

利用第三酶混液和index序列、通用引物对所述带接头片段进行PCR富集，得到所述DNA文库。