[发明专利]一种组织工程化周围神经组织及其制备方法

说明书

本发明公开了一种组织工程化周围神经组织及其制备方法，属于组织工程技术领域，制备方法如下：将种子细胞分离和培养、纯化和扩增后，体外诱导种子细胞分化成雪旺细胞，然后制备干细胞聚合体，再将干细胞聚合体植入丝素蛋白导管支架材料，形成组织工程化周围神经组织。采用上述方法制备的组织工程化周围神经组织可用于面神经及三叉神经分支等周围神经组织缺损再生修复，与目前存在的其他类型组织工程化神经相比，具有种子细胞获取容易，创伤小，体外诱导分化雪旺细胞分泌成神经相关因子提高神经再生效率，干细胞聚合体内包含充足的细胞量和丰富的细胞外基质，同时具有更好的生物活性和良好的生物安全性，并可显著缩短神经修复时间。

技术领域

本发明涉及组织工程技术领域，具体涉及一种组织工程化周围神经组织及其制备方法。

背景技术

因创伤、肿瘤侵袭或手术等原因造成的神经阻滞破坏是常见的临床问题。而神经组织损伤后伴随着神经功能障碍，如面神经分支损伤引起的面部表情肌运动障碍，这将给患者及其家人的身心带来巨大伤害和痛苦。因此，探索神经组织缺损修复的方法，再生具有生物活性的神经组织对患者组织功能的恢复和生活质量的提高具有重大的临床意义。

目前临床修复周围神经组织缺损的方法主要采用自体神经移植，这种方法也取得了良好的疗效。然而，自体神经移植也存在着明显的缺点：（1）获取的自体神经的长度和直径受限，造成因部分自体神经与受区神经不匹配而影响神经修复疗效；（2）自体神经获取不可避免的造成供区因手术导致的周围组织损伤、畸形和神经功能的丧失。此外，采用神经诱导再生材料（如：聚乙醇酸（PGA）神经桥接管、纤维蛋白胶胶连等）修复神经缺损，主要起到引导和支持作用（CN106730010A公开的《去细胞神经水凝胶用于制备周围神经损伤修复组合物的用途》和CN106729980B公开的《一种用于外周神经修复的仿生神经移植物及其制备方法》），但神经再生的长度受到了限制。因此，目前临床上缺乏一种有效周围神经组织缺损再生修复的方法。

随着组织工程和再生医学的飞速发展，越来越多的研究者利用组织工程技术开展组织、器官再生研究，这为临床上各种组织、器官缺损的治疗提供了新的方向。多项发明基于神经组织发育结合组织工程与再生医学技术，设计了种子细胞/支架材料复合体用于神经组织再生修复的策略，但目前这种策略存在一些不足：（1）多数采用早期外胚间充质干细胞或神经元细胞等作为种子细胞，存在临床获取困难且细胞量不足；（2）种子细胞需要采用生物胶等支架材料支持、传递和固定细胞，这对细胞生物学活性有一定影响。

综上，目前采用周围神经再生的大部分组织工程化周围神经组织，虽然可促进神经组织再生，但仅通过神经断端残留的少量细胞增殖并形成髓鞘，髓鞘化不全很难获得良好的支撑和引导神经再生。因此，目前需研制一种具有种子细胞临床获取容易、创伤小、细胞量充足，且包含丰富细胞外基质特点的，可在体内显著加速神经纤维平行性定向生长，释放成神经相关因子促进髓鞘形成的神经支架导管结构供受区神经缺损处移植，更有效地再生修复神经缺损的组织工程化周围神经组织。

发明内容

本发明为了解决上述的技术问题，而提供一种组织工程化周围神经组织及其制备方法。

本发明是按照以下技术方案实现的：

一种组织工程化周围神经组织的制备方法，将种子细胞分离和培养、纯化和扩增后，体外诱导种子细胞分化成雪旺细胞，然后制备干细胞聚合体，再将干细胞聚合体植入丝素蛋白导管支架材料，形成组织工程化周围神经组织。

进一步的，所述种子细胞包括去分化脂肪细胞、脂肪干细胞或骨髓间充质干细胞。

进一步的，所述去分化脂肪细胞的分离和培养、纯化和扩增的步骤如下：