[发明专利]一株重组酿酒酵母基因工程菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 202011622889.9 | 申请日： | 2020-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN112779172B | 公开（公告）日： | 2023-09-08 |
| 发明（设计）人： | 应汉杰;蒋颖;陈勇;梁偲策;赵伟;朱家庆;张涛;余斌 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/31;C12N11/02;C12P7/06;C12R1/865 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 211816 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 酿酒 酵母 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一株重组酿酒酵母基因工程菌在固定化发酵制备乙醇中的应用，其特征在于，所述重组酿酒酵母的Gis4基因失活；所述酿酒酵母为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)S288c；
所述Gis4基因失活后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重组酿酒酵母基因工程菌的构建方法包括如下步骤：
(1)以酿酒酵母的基因组DNA为模板，扩增得到Gis4基因的上游同源臂和下游同源臂；以质粒PUG6为模板，扩增得到G418片段；
(2)以步骤(1)得到的Gis4基因的上游同源臂、下游同源臂和G418片段为模板，扩增得到基因敲除片段；
(3)将步骤(2)得到的基因敲除片段转化至酿酒酵母感受态中，即得重组酿酒酵母基因工程菌。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述固定化发酵以天然有机载体、人工合成高分子载体、人工无机高分子材料、复合材料作为固定化介质
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述发酵的温度为30℃-40℃。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述发酵的发酵培养基配方如下：55-110g/L葡萄糖，3-6g/L蛋白胨、0.5-1g/L硫酸铵、3-6g/L磷酸二氢钾、3-6g/L酵母膏、0.5-1g/L硫酸镁、0.05-1g/L七水合硫酸亚铁、0.05-1g/L七水合硫酸锌，溶剂为水。
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