[发明专利]一种苯磷硫胺原料及其制剂中有关物质的测定方法

权利要求书

1.一种苯磷硫胺原料及其制剂中有关物质的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制供试品溶液、对照溶液、系统适用性溶液；

(2)设置高效液相检测条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为4.6mm×150mm，填料粒径为5μm，以庚烷磺酸钠溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，流速为0.8ml/min进行梯度洗脱；所述庚烷磺酸钠溶液中庚烷磺酸钠的浓度为2.0g/L，庚烷磺酸钠溶液的pH值为3.2；

(3)分别吸取供试品溶液和对照溶液，注入高效液相色谱仪，进行HPLC分析；

所述的有关物质包括：4-甲基-3-[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-苯甲酰氧基乙基)噻唑鎓、S-(6-甲酰基-2,7-二甲基-6,9,10,11-四氢-5H-嘧啶[4,5-b][1,5]二氮杂壬环-8-基)苯甲酸硫代酯、S-{(Z)-2-[(4-苯甲酰氨基-2-甲基嘧啶-5-基)甲基)-甲酰基氨基]-5-膦酰氧基-戊-2-烯-3-基}苯甲酸硫代酯、S,S＇-((3Z，3＇Z)-((羟基磷酰基)双(氧)双(4-(N-((4-氨基-2-甲基嘧啶-5-基)甲基)甲酰胺)戊-3-烯-1,3-二基)二苯甲酸硫代酯、5-(氨基甲基)-4-氨基-2-甲基嘧啶、5-(甲酰胺基甲基)-4-氨基-2-甲基嘧啶、苯甲酸、2-羰基-3-苯甲酰硫代酯基-5-磷酸戊酯、盐酸硫胺、磷酸硫胺；

所述梯度洗脱程序如下：

0-10min，流动相A的体积百分比为80％降至60％，流动相B的体积百分比为20％升至40％；

10-18min，流动相A的体积百分比为60％降至35％，流动相B的体积百分比为40％升至65％；

18-25min，流动相A的体积百分比为35％，流动相B体积百分比为65％；

25-25.1min，流动相A的体积百分比为35％升至80％，流动相B体积百分比为65％降至20％；

25.1-35min，流动相A的体积百分比为80％，流动相B体积百分比为20％。

2.根据权利要求1所述的苯磷硫胺原料及其制剂中有关物质的测定方法，其特征在于，所述的供试品溶液的配制方法为：精密称定苯磷硫胺，加稀释剂溶解稀释成含苯磷硫胺1mg/mL的溶液；

所述的对照溶液的配制方法为：精密量取供试品溶液1mL，用稀释剂稀释制成苯磷硫胺含量为1μg/L的溶液；

所述的系统适用性溶液的配制方法为：

(S1)分别称取4-甲基-3-[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-苯甲酰氧基乙基)噻唑鎓、S-(6-甲酰基-2,7-二甲基-6,9,10,11-四氢-5H-嘧啶[4,5-b][1,5]二氮杂壬环-8-基)苯甲酸硫代酯、S-{(Z)-2-[(4-苯甲酰氨基-2-甲基嘧啶-5-基)甲基)-甲酰基氨基]-5-膦酰氧基-戊-2-烯-3-基}苯甲酸硫代酯、S,S＇-((3Z，3＇Z)-((羟基磷酰基)双(氧)双(4-(N-((4-氨基-2-甲基嘧啶-5-基)甲基)甲酰胺)戊-3-烯-1,3-二基)二苯甲酸硫代酯、5-(氨基甲基)-4-氨基-2-甲基嘧啶、5-(甲酰胺基甲基)-4-氨基-2-甲基嘧啶、苯甲酸、2-羰基-3-苯甲酰硫代酯基-5-磷酸戊酯、盐酸硫胺、磷酸硫胺，加稀释剂溶解并稀释制成每1mL含各对照品500μg的杂质对照品贮备溶液；

(S2)精密称定苯磷硫胺，加稀释剂溶解，另取上述杂质对照品贮备溶液，制成每1ml含各对照品1μg、苯磷硫胺0.2mg的混合溶液，得到系统适用性溶液。

3.根据权利要求2所述的苯磷硫胺原料及其制剂中有关物质的测定方法，其特征在于，所述的稀释剂为流动相A与流动相B的体积比为80：20的溶液。

4.根据权利要求1所述的苯磷硫胺原料及其制剂中有关物质的测定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18。

5.根据权利要求1所述的苯磷硫胺原料及其制剂中有关物质的测定方法，其特征在于，所述液相色谱仪的紫外检测器的检测波长为244nm。