[发明专利]重组人GLP-1-Fc融合蛋白的纯化方法有效
| 申请号： | 202011623423.0 | 申请日： | 2020-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN112661864B | 公开（公告）日： | 2023-03-24 |
| 发明（设计）人： | 黄菁;刘海峰;聂洪霞;史传超;朱汝;解福生;郝向慧 | 申请（专利权）人： | 华润昂德生物药业有限公司;上海昂德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/18;C07K1/22 |
| 代理公司： | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光军;霍雪梅 |
| 地址： | 252201 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 glp fc 融合 蛋白 纯化 方法 | ||
1.一种重组人GLP-1-Fc融合蛋白的纯化方法，其特征在于，包括，将含有重组人GLP-1-Fc融合蛋白的样品采用亲和层析的方法进行粗纯后采用制备型色谱进一步纯化；所述制备型色谱的纯化方法包括：
(1)将初步提纯的产物进行阴离子交换层析；所述的阴离子交换层析的填料为PORPS50HQ填料；
(2)采用梯度洗脱方式将吸附在柱子上的杂蛋白洗脱下来；所述的梯度洗脱方式中的流动相由流动相A和流动相B组成；所述流动相A是甘氨酸缓冲液；所述的流动相B是甘氨酸氯化钠缓冲液；所述甘氨酸缓冲液的终浓度为50-100mmol/L；氯化钠的终浓度为0.5-1mol/L；所述流动相A以及流动相B的pH值为6.5-9.5；所述的梯度洗脱为：B相在15CV内由40％升至60％，A相在15CV内由60％降至40％；
(3)采用90％的流动相B相进行等度洗脱方式收集主峰即得目的产物重组人GLP-1-Fc融合蛋白。
2.按照权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述的阴离子交换层析的填料的平均粒度为10-50μm，平均长度为15-25cm。
3.按照权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述的阴离子交换层析的填料的平均粒度为30-50μm，长度为18-22cm
4.按照权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述流动相A以及流动相B的pH值为8.5-9.5。
5.按照权利要求4所述的纯化方法，其特征在于，所述流动相A以及流动相B的pH值为pH9.0。
6.按照权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述甘氨酸缓冲液的终浓度为50mmol/L；氯化钠的终浓度为1mol/L。
7.按照权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，在采用制备型色谱进行纯化，检测柱温为18-26℃，洗脱流速为1L/min，检测波长为280nm。
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