[发明专利]重组人GLP-1-Fc融合蛋白的纯化方法

说明书

本发明公开了重组人GLP‑1‑Fc融合蛋白的纯化方法，包括，将含有重组人GLP‑1‑Fc融合蛋白的样品进行粗纯后采用制备型色谱进一步纯化；所述制备型色谱的纯化方法包括：(1)将初步提纯的产物进行阴离子交换层析；(2)采用梯度洗脱方式将吸附在柱子上的杂蛋白洗脱下来；(3)采用等度洗脱方式收集主峰即得目的产物。本发明纯化方法工艺简单可行，纯化后样品纯度高且得率高，可一步将粗样纯度由95.0％提高至99.6％以上，且可去除宿主蛋白，纯化后样品收率稳定，粗样样品的上样量大，极大的节省了纯化成本，工艺稳定可靠，具有较强的可放大性，适合作为工业化生产纯化重组人GLP‑1类似物Fc融合蛋白。

技术领域

本发明涉及融合蛋白的纯化，尤其涉及重组人GLP-1-Fc融合蛋白的纯化方法，属于重组人GLP-1-Fc融合蛋白的纯化领域。

背景技术

近年来，中国国内糖尿病患病率呈逐渐攀升趋势。据调查数据显示：2019年中国糖尿病患病人数约为1.16亿人，中国已成为全球糖尿病患病人数最多的国家；与此同时，糖尿病患者数量仍在持续快速增长。预测2040年中国糖尿病患病人群数量将达到1.51亿人。

重组人胰高血糖素样肽-1类似物(GLP-I)，该多肽由31个氨基酸组成，能够刺激胰岛细胞产生胰岛素，从而达到控制血糖的目的。胰高血糖素样肽-I(GLP-I)可促进胰岛素释放，降低血浆中的胰高血糖素水平，降低胃排空的速率，促进饱食感并刺激胰岛的生物合成和β细胞的增殖，可用于2型糖尿病的治疗。在我国2型糖尿病发病广泛，如果不及时加以治疗，容易转变成1型糖尿病，给患者和国家造成很大负担，因此开发这类药物的需求极为迫切。

重组人GLP-1-Fc融合蛋白是把GLP-I与人的抗体Fc片段融合，GLP-I-Fc分子的半衰期明显增加，从原形的数分钟提高到将近4天，同时把GLP-1分子(7-37)的三个氨基酸位点进行了突变，分别是第8位Ala改为Gly,第22位Gly改为Glu,第36位Arg改为Gly,这样与改构后的分子与天然分子的同源性只有90％。由于2型糖尿病患者需要长期用药，加上GLP-I-Fc具有半衰期延长的特点，使其在体内作用的时间也较原形GLP-I分子大大延长。每周给药一次即可达到治疗2型糖尿病的目的。

在生物药的发展史中，制备型高效液相技术的引入为生物药质量的提升起到十分关键的作用，使得利用基因重组技术制备的样品的纯度从90％左右提升到99％甚至更高，使得药物的安全性进一步得到保障。因此生产厂家都会对色谱纯化工艺进行深度研究和优化，以便得到质量更高，成本更低的产品。因此，开发一种重组人GLP-1类似物融合蛋白的制备纯化方法，提高样品的纯度，去除宿主蛋白，将具有重要的市场价值和应用前景。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种重组人GLP-1类似物Fc融合蛋白的制备型色谱纯化方法；

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种重组人GLP-1-Fc融合蛋白的制备型色谱纯化方法，包括，将含有重组人GLP-1-Fc融合蛋白的样品进行粗纯后采用制备型色谱进一步纯化。

其中，所述制备型色谱的纯化方法包括：(1)将初步提纯的产物进行阴离子交换层析；(2)采用梯度洗脱方式将吸附在柱子上的杂蛋白洗脱下来；(3)采用等度洗脱方式收集主峰即得目的产物重组人GLP-1-Fc融合蛋白。

所述的重组人GLP-1-Fc融合蛋白样品的粗纯方法包括但不限于亲和层析、过滤离心法或硫酸铵沉淀法中的任何一种，优选为亲和层析法。