[发明专利]一组用于检测丹毒丝菌属相关菌种的引物组合、试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一组用于检测丹毒丝菌属相关菌种的引物组合、试剂盒及检测方法。所述的引物组合包括以下核苷酸序列：检测Erysipelothrix rhusiopathiae strFujisawa(firmicutes)的引物对由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的两条核苷酸序列组成；检测Erysipelothrix rhusiopathiae strNCTC8163的引物对由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的两条核苷酸序列组成。本发明提供的引物组合能准确检测出上述两种丹毒丝菌株，所述检测方法具有特异性强、准确性好、操作简便、成本低的优点。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一组用于检测丹毒丝菌属相关菌种的引物组合、试剂盒及检测方法。

背景技术

猪丹毒(Swine erysipelas)又称猪丹毒丝菌病或猪丹毒杆菌病，是猪感染红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)引起的急性、热性传染病，其特征主要表现为急性败血症和亚急性疹块型，也有表现慢性多发性关节炎或心内膜炎，常导致猪的急性死亡，给养殖业造成了严重的损失，也给人们的食品卫生和人体健康带来威胁。此外，该疾病是一种条件性人畜共患病，红斑丹毒丝菌可通过伤口感染接触到病猪的人员，因此对饲养员和屠宰员也都可能造成危害。有相关报道，从人尿路感染患者和糖尿病患者的尿道口及外阴部分分离到万古霉素和氨基糖苷类的抗性猪丹毒丝菌，还有报道猪丹毒丝菌引起人心内膜炎、脓毒性关节炎、皮肤损伤及死亡的报道。

由于丹毒丝菌属细菌的抵抗力和生长繁殖能力很强，常大量存在于圈舍的稻草中，在尸体中也能存活数月，不易被彻底消灭，因此猪丹毒属于防控难度较大的疾病类型。而农业部的行业标准《猪丹毒诊断技术》(NY/T 566-2002)中关于猪丹毒的检测方法只有病原分离和血清培养凝集试验，这两种方法对生物安全环境的要求比较高，普通实验室无法办法满足要求而且费时费力。同时，该检测方法费时费力，不适用于实际检测的需要，也不适用于大规模流行病学的调查。

目前有相关研究采用LAMP技术对该病毒进行检测，但LAMP技术共有4条不同的特异性引物，故而检测结果准确度更高，但是由于是恒温反应，缺少类似PCR的热启动酶，在设备升温阶段容易产生非特异性扩增从而影响检测结果。例如中国专利CN112029878A公开了一种高效检测猪丹毒丝菌的引物以及试剂盒，是以改良后的LAMP技术为基因扩增反应原理，在反应体系里加入金纳米颗粒，吸附ssDNA和蛋白酶，抑制升温过程中的非特异性反应，达到热启动的目的，避免在升温过程中的非特异性反应，能快速准确地给出检测结果，但存在操作复杂、成本过高的不足。

因此，急需建立一种简便、快速、准确、成本低的红斑丹毒丝菌快速检测方法。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明要解决的技术问题是提供一组用于检测丹毒丝菌属相关菌种的引物组合、包含该引物组合的检测试剂盒，以及采用该检测试剂盒对丹毒丝菌属相关菌种进行检测的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：

一方面，本发明提供了一组用于检测丹毒丝菌属相关菌种的引物组合，所述的引物组合包括以下核苷酸序列：检测Erysipelothrix rhusiopathiae strFujisawa(firmicutes)的引物对由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的两条核苷酸序列组成；检测Erysipelothrix rhusiopathiae strNCTC8163的引物对由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的两条核苷酸序列组成。

上述引物组合能准确检测出上述两种丹毒丝菌株，其中，PCR扩增片段长度175bp的为Erysipelothrix rhusiopathiae strFujisawa(firmicutes)，PCR扩增片段长度300bp的为Erysipelothrix rhusiopathiae strNCTC8163。