[发明专利]一种重组氧化葡糖杆菌工程菌及其合成米格列醇中间体的应用

权利要求书

1.一种重组氧化葡糖杆菌工程菌，其特征在于所述重组氧化葡糖杆菌工程菌是将透明颤菌血红蛋白基因vhb和山梨醇脱氢酶基因sldAB共同转入宿主菌构建而成；所述宿主菌为氧化葡糖杆菌。

2.如权利要求1所述重组氧化葡糖杆菌工程菌，其特征在于所述宿主菌为氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)CCTCC NO.M208069。

3.如权利要求1所述重组氧化葡糖杆菌工程菌，其特征在于所述透明颤菌血红蛋白基因vhb核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

4.如权利要求1所述重组氧化葡糖杆菌工程菌，其特征在于所述山梨醇脱氢酶基因sldAB核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。

5.如权利要求1所述重组氧化葡糖杆菌工程菌，其特征在于重组氧化葡糖杆菌工程菌的构建采用SEQ ID NO.5所示核苷酸序列为gHp0169启动子，SEQ ID NO.6所示核苷酸序列为终止子。

6.一种权利要求1所述重组氧化葡糖杆菌工程菌在催化N-羟乙基葡萄糖胺合成6-脱氧-6-氨基(N-羟乙基)-α-L-呋喃山梨糖中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述的应用为：以重组氧化葡糖杆菌工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以N-羟乙基葡萄糖胺为底物，以MgSO₄为辅助底物，以水为反应介质，调节pH 2-6，构成转化体系，在10-30℃、100-220rpm条件下反应完全后，获得含6-脱氧-6-氨基(N-羟乙基)-α-L-呋喃山梨糖的反应液，分离纯化，获得6-脱氧-6-氨基(N-羟乙基)-α-L-呋喃山梨糖。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于转化体系中，底物加入浓度为60-120g/L；辅助底物加入浓度为2.5g/L；湿菌体加入浓度为40-80g/L。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：重组氧化葡糖杆菌工程菌接种至SYK发酵培养基中，在温度为30℃，搅拌转速为400rpm，通气量为2vvm的条件下培养至OD₆₀₀达到8.5-9.5下罐，离心发酵液，取沉淀即为湿菌体；所述SYK发酵培养基终浓度组成：山梨醇80g/L，酵母粉20g/L，硫酸铵2g/L，谷氨酸钠2g/L，硫酸镁0.6g/L，K₂HPO₄5g/L和KH₂PO₄ 5g/L，溶剂为水，pH为6.5。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于所述重组氧化葡糖杆菌工程菌在发酵前先进行活化和种子扩大培养，再将种子液以体积浓度1-5％的接种量接种至SYK发酵培养基，所述种子液制备方法为：将重组氧化葡糖杆菌工程菌接种于含有50μg/L庆大霉素的SY固体培养基上，30℃培养2天生长出单菌落；利用接种环将单菌落接种到含终浓度50μg/L的庆大霉素抗生素的SY液体培养基中，在30℃，150rpm培养条件下培养至OD₆₀₀为5.0-5.5，获得种子液；SY液体培养基终浓度组成：55g/L山梨醇，20g/L酵母粉，5g/L K₂HPO₄和5g/L KH₂PO₄，溶剂为水，pH为6.5；SY固体培养基是在SY液体培养基中添加20g/L琼脂。