[发明专利]利用生物酶解制备芹菜素的方法

权利要求书

1.一种利用生物酶解制备芹菜素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、酶解：向反应容器中加入野漆树苷与低级醇溶液，混合均匀，加热升温至70℃以上保温，再冷却至60℃以下，加入酸调节pH值，加入复合酶进行酶解反应，复合酶包括鼠李糖苷酶和葡萄糖苷酶，检测野漆树苷是否反应完全，酶解反应完成后升温将复合酶灭活，获得反应液，其中，所述低级醇溶液采用含碳数为Cl～C6的一元醇，所述低级醇溶液中低级醇的浓度为20％～30％；酸调节pH值至2～4；

S2、分离：将反应液过滤，获得芹菜素粗晶，将芹菜素粗晶与低级醇溶液混合并搅拌至芹菜素粗晶完全溶解，获得复溶液；

S3、纯化：复溶液冷却结晶，过滤，获得芹菜素，

其中，步骤S1中复合酶先进行活化，再进行酶解反应；

复合酶活化包括：将鼠李糖苷酶溶于水中进行活化获得鼠李糖苷酶液，将葡萄糖苷酶溶于水中进行活化获得葡萄糖苷酶液，将鼠李糖苷酶液与葡萄糖苷酶液混合，所述鼠李糖苷酶液与所述葡萄糖苷酶液的酶比活力为10000～20000∶10000；

所述复合酶的体积与所述野漆树苷的质量比为(2～6)∶40；

所述复合酶的酶解反应时间为0.5h～72h，酶解反应温度为20℃～75℃。

2.根据权利要求1所述的利用生物酶解制备芹菜素的方法，其特征在于，

步骤S3中的过滤后的滤液进行旋转蒸发至无醇味，获得浓缩液，将浓缩液进行冷冻干燥，获得芹菜素。

3.根据权利要求1所述的利用生物酶解制备芹菜素的方法，其特征在于，

所述野漆树苷的质量与低级醇溶液的体积比为1∶(5～40)。

4.根据权利要求1所述的利用生物酶解制备芹菜素的方法，其特征在于，

步骤S1中加热升温的温度为70℃～100℃，保温的时间为1min～60min，再冷却至30℃～60℃。

5.根据权利要求1所述的利用生物酶解制备芹菜素的方法，其特征在于，

检测野漆树苷是否反应完全具体步骤包括：

复合酶的酶解反应时间为4h～12h，酶解反应2h～6h后，每间隔1h将酶解反应液在薄层层析色谱上点样，观察野漆树苷的斑点是否消失，消失判定反应完成；或者

复合酶的酶解反应时间为4h～12h，酶解反应2h～6h后，每间隔1h将酶解反应液进行高效液相色谱检测，野漆树苷吸收峰面积低于1％，判定反应完成。

6.根据权利要求1所述的利用生物酶解制备芹菜素的方法，其特征在于，

步骤S1中酸采用盐酸、硫酸、冰醋酸或甲酸中的一种。

7.根据权利要求1所述的利用生物酶解制备芹菜素的方法，其特征在于，步骤S2中，

所述低级醇溶液采用含碳数为Cl～C6的一元醇，所述低级醇溶液中低级醇的浓度为70％～100％；

所述芹菜素粗晶的质量与醇溶液的体积比为1∶(10～20)。

8.根据权利要求1所述的利用生物酶解制备芹菜素的方法，其特征在于，

步骤S3中复溶液冷却结晶包括：复溶液冷却至室温，搅拌析晶10h～20h。