[发明专利]用于抗缪勒管激素检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法

说明书

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及用于抗缪勒管激素(AMH)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法。本发明采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，重复性好，检测范围宽。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

技术领域

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及用于抗缪勒管激素(AMH)检测的组合物，该组合物的应用，包含该组合物的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒，以及基于该组合物或试剂盒的磁微球电化学发光免疫检测方法。

背景技术

抗缪勒管激素(AMH)是一种糖蛋白，是由2个完全相同的72kDa单体以二硫键连接组成的二聚体。AMH属于转化生长因子-β家族。

AMH主要用于评估卵巢储备功能，来预测不孕不育女性对控制性卵巢刺激的反应。AMH还可用于估测女性个体到达更年期的时间。另外，研究表明AMH可用于诊断和监测患有多囊卵巢综合征(PCOS)的女性，在促性腺激素正常的无排卵的PCOS患者中AMH浓度升高。

到目前为止，用于检测人血清中AMH的方法主要有：酶联免疫法(ELISA)和酶促磁微粒化学发光。本发明采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，检测范围宽，重复性好。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

发明内容

本发明提供了一种用于抗缪勒管激素(AMH)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法，具有生产效率高、检测时间短、适用于全自动检测，具有更高的灵敏度、线性范围宽等优点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了用于抗缪勒管激素(AMH)检测的组合物，包括AMH试剂Ra、AMH试剂Rb、链霉亲和素超顺磁微球；

所述AMH试剂Ra包括含生物素标记的抗AMH单克隆抗体；

所述AMH试剂Rb包括含三联吡啶钌标记的抗AMH单克隆抗体；

所述链霉亲和素超顺磁微球包括表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁微球。

在本发明的一些具体实施方案中，所述超顺磁微球的粒径在1.5～5.0μm。

在本发明的一些具体实施方案中，所述AMH试剂Ra中，每个抗体分子表面的生物素分子标记量为2～5个；所述AMH试剂Rb中，每个抗体分子表面的钌分子标记量为2～10个。

在本发明的一些具体实施方案中，所述AMH试剂Ra的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗AMH单克隆抗体与生物素混合，制得所述AMH试剂Ra；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。

在本发明的一些具体实施方案中，所述AMH试剂Ra的制备方法为：取2.0mg的用于标记生物素抗缪勒管激素(AMH)抗体，使用脱盐柱PD10更换缓冲液为磷酸盐缓冲液(pH＝7.8)，使用超滤管浓缩后调整浓度为2.0mg/mL，加入30～80μg的生物素(使用DMF溶解)，混匀反应30分钟，使用脱盐柱PD10去除未标记的生物素。使用含1％的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)稀释标记生物素的抗缪勒管激素(AMH)抗体到1mg/L，作为AMH试剂Ra。

在本发明的一些具体实施方案中，所述AMH试剂Rb的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗AMH单克隆抗体与三联吡啶钌混合，制得所述AMH试剂Rb；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。